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Molekulare und immunologische Charakterisierung von Profilin aus Weizen (Triticum aestivum)
Peter Forstenlechner
Art der Arbeit
Diplomarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Lebenswissenschaften
Betreuer*in
Pavel Kovarik
DOI
10.25365/thesis.1307
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-30100.52602.692866-0
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Krankheiten die nach dem Verzehr von Weizenprodukten bzw. nach der Inhalation von Weizenmehl auftreten sind Zöliakie, Weizenallergie und Bäckerasthma.
Eine weitere, jedoch selten auftretende Krankheit, ist die durch den Verzehr von Weizen mit nachfolgender körperlicher Betätigung ausgelöste Anaphylaxie (WDEIA)
Ein potentieller Auslöser für Weizenallergie, WDEIA und Bäckerasthma ist Profilin aus Weizen.
Ziel dieser Arbeit war es, Profilin (Tri a 12), ein Protein aus Weizen (Triticum aestivum) zu klonieren, als rekombinantes nicht-Fusionsprotein in E. coli zu exprimieren, zu reinigen und seine Eigenschaften zu untersuchen.
Gesamt-RNA wurde aus Weizen (Cultivar Edison) isoliert und mittels PCR konnte die Tri a 12 cDNA kloniert und sequenziert werden.
Die kodierende Sequenz besteht aus 396 Basenpaaren (inklusive Start/Stoppcodon) und wurde in den Expressionsvektor pET17b kloniert. Für die Expression bei 30°C wurden E. coli BL21(DE3) Zellen verwendet.
Rekombinantes Tri a 12 wurde aus der löslichen Zellfraktion isoliert und mittels
Affinitätschromatographie gereinigt. Tri a 12 besteht aus 131 Aminosäuren (inklusive Start-Methionin) und hat eine intakte molekulare Masse von 14,031 Da und einen isoelektrischen Punkt von 5,04.
N-terminales Sequenzieren der ersten fünf Aminosäuren und Massenspektroskopie verifizierten die Sequenz von Weizenprofilin. Zirkuläre Dichroismus Spektroskopie zeigte, dass rTri a 12 nach Reinigung als gefaltetes Protein vorliegt und eine gemischte α/β-Sekundärstruktur besitzt. IgE Bindung wurde mittels IgE Immunoblot und IgE ELISA untersucht. Hierfür wurden Seren von Patienten mit diagnostizierten allergischen Symptomen nach dem Verzehr von Weizenprodukten bzw. Weizenmehlinhalation verwendet.
Tri a 12, ein Mitglied der Profilin-Familie, wurde identifiziert und charakterisiert.
Abstract
(Englisch)
There are three major diseases caused by either wheat consumption or wheat flour inhalation: celiac disease, wheat allergy and bakers’ asthma.
A fourth disease is the very rare wheat-dependant exercise induced anaphylaxis (WDEIA). These four diseases display different symptoms and are caused by different allergens. One potential causative agent is wheat profilin.
Total RNA from wheat (cultivar Edison) was isolated and PCR with gene specific primers was performed. cDNA encoding for Tri a 12 was cloned and sequenced. The coding sequence consisting of 396 bp (including start- and stopcodon) was cloned into the expression-vector pET17b. E.coli BL21(DE3) was used as host strain for expression at 30°C. Recombinant Tri a 12 was isolated from the soluble cell fraction and purified by affinity chromatography. Tri a 12 has a deduced amino acid sequence of 131 amino acid residues (including initial methionine) and an intact molecular mass of 14, 031 kDa and an isoelectric point of 5.04.
N-terminal sequencing of the first five amino acid residues and mass spectroscopy confirmed the expected wheat profilin sequence.
Circular dichroism spectroscopy showed that rTri a 12 was expressed and purified as a folded protein since it displayed a mixed α/β-secondary structure. IgE binding properties were investigated by IgE immunoblotting and IgE ELISA.
Sera from diagnosed wheat allergic patients were used for the investigation of IgE binding properties.
Tri a 12, a member of the profilin protein family, was identified and characterised. It represents another molecule suitable for component-resolved diagnosis and for defining cross reactivity among profilins.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
food allergy wheat recombinant Profilin
Schlagwörter
(Deutsch)
Nahrungsmittel Allergie Weizen rekombinant Profilin
Autor*innen
Peter Forstenlechner
Haupttitel (Englisch)
Molekulare und immunologische Charakterisierung von Profilin aus Weizen (Triticum aestivum)
Paralleltitel (Englisch)
Molecular and immunological characterisation of profilin from wheat (Triticum aestivum)
Publikationsjahr
2008
Umfangsangabe
99 S. : graph. Darst.
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Pavel Kovarik
Klassifikationen
42 Biologie > 42.13 Molekularbiologie ,
42 Biologie > 42.30 Mikrobiologie
AC Nummer
AC07514652
Utheses ID
1020
Studienkennzahl
UA | 441 | | |