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Analysis of the effects of siRNA-mediated knock-down of glucocorticoid target genes in primary erythroid progenitor cells
Michela Parth
Art der Arbeit
Diplomarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Lebenswissenschaften
Betreuer*in
Ernst Müllner
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-29666.67775.233862-7
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Hämatopoetische Stammzellen haben die Fähigkeit zur Selbsterneuerung und können zu den unterschiedlichen adulten Blutzellentypen differenzieren.
Steroidhormone, wie z.B. Glukokortikoide, spielen in der Kontrolle über die Entscheidung der Selbsterneuerung und Differenzierung zu erythroiden Vorläuferzellen eine essentielle Rolle. Glukokortikoide entfalten ihre Wirkung durch Bindung an den nukleären Glukokortikoid-Rezeptor (GR). Dieser agiert nach erfolgter Aktivierung als Transkriptionsfaktor und moduliert auf diese Weise direkt oder indirekt die Gentranskription verschiedenster Zielgene.
In meiner Diplomarbeit hab ich die Funktion folgender drei GR-Zielgene analysiert: Raf-1, Tis11d, FKBP51. Alle Experimente wurden in einem primären erythroiden Zellkultur-System durchgeführt, wobei die erythroiden Vorläuferzellen aus humanem Nabelschurblut isoliert wurden. Ziel meiner Diplomarbeit war es eine verlässliche und reproduzierbare Transfektions-Methode zu etablieren, mit deren Hilfe ich die Expression aller drei GR-Zielgene durch Elektroporation mit siRNAs erfolgreich vermindern konnte. Ziel der Runterregulierung war es, dadurch die Funktion derselben Gene herauszufinden. Dafür wurden morphologische Veränderungen in den Zellen, Effekte auf deren Viabilität und auf andere Signalwege analysiert. Im Laufe meiner Arbeit konnte ich zeigen, dass eine verminderete Expression von Tis11d und FKBP51 eine erhöhte Apoptose zur Folge hatte. Daraus konnte geschlossen werden, dass Tis11d und FKBP51 womöglich in anti-apoptotischen Mechanismen in erythroiden Vorläuferzellen involviert sind. Doch die genauen molekularbiologischen Hintergründe, sowie die möglich involvierten Signalwege müssen noch ausführlicher untersucht werden.
Abstract
(Englisch)
Hematopoiesis and erythropoiesis are complex processes, which have to be under strict control. Steroid hormones, such as glucocorticoids, have been shown to be one of the key regulators of the decision between self-renewal and differentiation into erythroid progenitor cells. Glucocorticoids have been demonstrated to be involved in regulation of numerous physiological and developmental processes throughout the body, such as regulation of lipid and protein metabolism, regulation of central nervous system functions and modulation of the immune system. Glucocortiocids bind to their nuclear receptor (GR), which then functions as a transcription factor and induces expression or inhibition of various target genes.
In my diploma thesis I studied the function of the three different glucocorticoid target genes: Raf-1, Tis11d and FKBP51. All of the experiments were performed in a primary erythroid cell culture system, derived from umbilical cord blood.
During my diploma thesis I established a reliable and reproducible method for transfection of human EPCs by electroporation. With this method I could successfully knockdown all three target genes by electroporation with complementary siRNAs. Downregulation of Raf-1, Tis11d and FKBP51 gave us insights into their function and the mechanisms in which they are involved during erythroid cell proliferation and spontaneous differentiation. Morphological changes, effects on the cell viability and changes in downstream signaling after the knock-down were analysed. While there were no remarkable effects after the Raf-1 knock-down, we could show that downregulation of Tis11d and FKBP51 led to an increase of apoptosis. This indicates that both GR-target genes are involved in anti-apoptotic mechanisms within erythroid progenitor cells.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
Glucocorticoid-target genes electroporation/ siRNA erythroid progenitor cells apoptosis
Schlagwörter
(Deutsch)
Glukokortikoid-Zielgene Elektroporation siRNA erythroide Vorläuferzellen Apoptose
Autor*innen
Michela Parth
Haupttitel (Englisch)
Analysis of the effects of siRNA-mediated knock-down of glucocorticoid target genes in primary erythroid progenitor cells
Paralleltitel (Deutsch)
Analyse der Effekte von siRNA-induzierter Runterregulierung von Glukokortikoid-Zielgenen in primären erythroiden Vorläuferzellen
Publikationsjahr
2011
Umfangsangabe
IV, 137 S: Ill., graph. Darst.
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Ernst Müllner
Klassifikationen
42 Biologie > 42.13 Molekularbiologie ,
42 Biologie > 42.15 Zellbiologie
AC Nummer
AC08879068
Utheses ID
12202
Studienkennzahl
UA | 441 | | |