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Comparison of the determination of folate vitamers with hydrophilic interaction chromatography and reversed phase chromatography
Deborah Lay
Art der Arbeit
Diplomarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Lebenswissenschaften
Betreuer*in
Jürgen König
DOI
10.25365/thesis.17395
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-29977.21674.451770-3
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Um den Bedarf der Bevölkerung an Folaten zu decken und somit Krankheiten zu verhindern ist es unbedingt nötig die Folatkonzentration in verschiedenen Nahrungsmitteln, Serum sowie Blut so genau wie möglich festzustellen.
Daher wurde für diese Arbeit eine neue, noch nicht so übliche HILIC (Acclaim® HILIC-10) Säule für HPLC/MS verwendet um 3 Folatmetaboliten (Folsäure, Tetrahydrofolsäure, 5-Methyltetrahydrofolsäure) zu analysieren und um die Ergebnisse mit denen einer reversed phase Säule zu vergleichen.
Zuvor wurden Stabilitäts-Lagerungs-Tests durchgeführt um festzustellen bei welcher Temperatur die Folatmetaboliten am stabilsten gelagert werden können um die besten Ergebnisse zu erzielen.
Die Stabilitätstests bestätigten, dass Folsäure der stabilste aller 3 Metaboliten war, und dass die Lagerung der Metaboliten bei -20°C in verdunkelten Fläschchen ausreichend ist für den Umfang dieser Arbeit.
Die Fachliteratur zeigte bessere Ergebnisse mit HILIC Säulen als den üblicherweise benutzten reversed phase Säulen. Allerdings konnte das in dieser Arbeit nicht bestätigt werden. Die reversed phase Säule zeigte bei allen Metaboliten ähnlichen Ergebnissen mit ähnlicher Quantifizierungsgrenze wie die der HILIC Säule.
Bessere Ergebnisse könnten möglicherweise durch Verändern von verschiedenen Faktoren wie Säulentemperatur, Puffer-pH, stationäre Phase sowie die Zusammensetzung der mobilen Phase erzielt werden. Auch die Verwendung einer Ionenfalle oder eines Tandem-Massenspektrometers als Detektor für das LC System an Stelle des QTOF Massenspektrometers könnte die Empfindlichkeit erhöhen. Weitere Studien sind von Nöten, um die richtigen Einstellungen und Verhältnisse für die Folatanalyse zu finden, die helfen, genaue und gute Ergebnisse mit HILIC zu erzielen.
Abstract
(Englisch)
It is essential to detect folate concentration in food, serum and blood accurately to improve the populations supply of it and to avoid the occurrence of several diseases. Therefore a newer, not so commonly used HILIC column (Acclaim® HILIC-10) for HPLC/MS was used in this thesis to analyse 3 folate metabolites (folic acid, tetrahydrofolic acid and 5-methyltetrahydrofolic acid). The results were then compared with the results of the analysis with a reversed phase column.
Additionally stability storage tests were performed, in order to verify at what storage temperature folates are most stable. Stability tests have shown that folic acid confirms to be the most stable metabolite and that storage of the vitamers at -20°C and in glass amber vials is sufficient for this thesis.
Literature assures of achieving better results with HILIC columns than the more commonly used reversed phase columns. However in this thesis this could not be proven. The reversed phase column showed nearly the same sensitivity concerning all folate metabolites, which resulted in nearly the same limits of detection as the Acclaim® HILIC-10 column.
Better performance might have been achieved by varying factors such as column temperature, buffer pH, type of stationary phase or composition of the mobile phase. Also coupling an ion trap or a quadrupole analyser as a mass spectral detector to the LC system instead of the time of flight mass spectrometer might also improve sensitivity.
Further studies should be done to find the right circumstances and conditions so that accurate and better results can be obtained when using hydrophilic liquid interaction chromatography for folate analysis.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
folate folic acid 5-MTHF THF HILIC hydrophilic liquid interaction chromatography HPLC reversed phase chromatography mass spectrometry MS stability
Schlagwörter
(Deutsch)
Folat Folsäure 5-MTHF THF HILIC hydrophile Interaktionschromatographie HPLC Umkehrphasenchromatographie Massenspektrometer MS Stabilität
Autor*innen
Deborah Lay
Haupttitel (Englisch)
Comparison of the determination of folate vitamers with hydrophilic interaction chromatography and reversed phase chromatography
Paralleltitel (Deutsch)
Vergleich der Bestimmung von Folaten mittels hydrophiler Interaktionschromatographie und Umkehrphasenchromatographie
Publikationsjahr
2011
Umfangsangabe
VII, 79 S. : graph. Darst.
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Jürgen König
Klassifikation
30 Naturwissenschaften allgemein > 30.03 Methoden und Techniken in den Naturwissenschaften
AC Nummer
AC08882685
Utheses ID
15592
Studienkennzahl
UA | 474 | | |