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Validation of PP2A substrates Net1 and Kin4 via newly developed controls in M-Track
Sonja Kuderer
Art der Arbeit
Diplomarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Zentrum für Molekulare Biologie
Betreuer*in
Egon Ogris
DOI
10.25365/thesis.24013
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-29817.46932.293361-2
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Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Protein Phosphatase 2A (PP2A), eine heterotrimere Protein Serin/Threonin Phosphatase (PSTP), dephosphoryliert viele Substrate und setzt sich aus einer strukturellen A, einer katalytischen C und einer regulatorischen B Untereinheit zusammen. In S.cerevisiae werden die beiden regulatorischen Untereinheiten für Substrat-Ansteuerung von CDC55 und RTS1 codiert. Da die kurzlebigen PP2A-Substrat Kontakte nur sehr schwer detektierbar sind, hat das Ogris Labor M-Track eingeführt, eine Yeast-Two-Hybrid basierte Methode. Mittels M-Track wurden bereits zwei PP2A-Zielproteine, Nucleolar silencing establishing factor and telophase regulator 1 (Net1) und Kinase 4 (Kin4) identifiziert. Experimente dieser Diplomarbeit bestätigten diese Ergebnisse und analysierten Parameter, welche M-Track negativ beeinflussen könnten, wie Überexpression und sterische Probleme der Fusionsproteine sowie die Effekte von endogenen Substraten. Ergebnisse dieser Diplomarbeit wiesen darauf hin, dass sterische Parameter die vorhandene Methylierungsspezies beeinflussen können und dass das Vorhandensein endogener Substrate M-Track nicht oder kaum beeinflusst. Die Substrat-Detektierung auf endogenen Levels zeigte sehr schwache Signale und muss noch optimiert werden.
Abstract
(Englisch)
Protein Phosphatase 2A (PP2A), a heterotrimeric protein serine/threonine phosphatase (PSTP), conducts the dephosphorylation of many substrates. It is composed of a structural A, a catalytic C and a regulatory B subunit, which regulates different target proteins. In S.cerevisiae the two regulatory subunits for substrate targeting are encoded by CDC55 and RTS1. Identification of the PP2A substrates is difficult as their short-lived substrate contact can not be detected with today´s methods. The Ogris lab introduced M-Track, a Yeast-Two-Hybrid based method to detect and identify PP2A target proteins. Experiments in this diploma thesis showed the interaction with PP2A target proteins, Nucleolar silencing establishing factor and telophase regulator 1 (Net1) and kinase 4 (Kin4) and aimed to analyze parameters, which might negatively influence M-Track such as overexpression and sterical hindrance of fusion proteins as well as the effects of present endogenous substrates. Results provided evidence that sterical parameters have an influence on the present methylation species whereas the presence of endogenous substrates has no or only little influence on M-Track. At endogenous levels an M-Track detection of PP2A substrates showed only weak signals and has to be further optimized.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
M-Track PP2A Cdc55 Rts1 Net1 Kin4
Schlagwörter
(Deutsch)
M-Track PP2A Cdc55 Rts1 Net1 Kin4
Autor*innen
Sonja Kuderer
Haupttitel (Englisch)
Validation of PP2A substrates Net1 and Kin4 via newly developed controls in M-Track
Paralleltitel (Deutsch)
Validierung von den PP2A Substraten Net1 und Kin4 anhand neu entwickelter Kontrollen in M-Track
Publikationsjahr
2012
Umfangsangabe
94 S. : graph. Darst.
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Egon Ogris
Klassifikation
42 Biologie > 42.13 Molekularbiologie
AC Nummer
AC11053316
Utheses ID
21475
Studienkennzahl
UA | 490 | | |