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Regulatory factors controlling invasion of first trimester human trophoblasts
Katarzyna Biadasiewicz
Art der Arbeit
Dissertation
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Lebenswissenschaften
Betreuer*in
Martin Knöfler
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Alle Rechte vorbehalten / All rights reserved
DOI
10.25365/thesis.27229
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-30308.11215.310769-2
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Abstracts

Abstract
(Deutsch)
Während meiner Dissertation untersuchte ich wie unterschiedliche Faktoren den Prozess der Invasion regulieren und beeinflussen können. Mein erstes Projekt befasste sich mit der AP-2 Familie der Transkriptionsfaktoren, im speziellen mit AP-2α. Zu Beginn zeigte ich die Expression von AP-2α in plazentalem Gewebe, primären isolierten Trophoblasten und der Trophoblasten Zelllinie SGHPL-5. Anschließend führte ich einen AP-2α knock-down durch Transfektion mit short hairpin RNA in SGHPL-5 Zellen. In EVTs setzte ich siRNA Oligonukleotide zum Gen-silencing ein. Funktionelle Auswirkungen des Knock-downs wurden dann in Bezug auf Invasion durch beschichtete Transwells und Proliferation durch Ermittlung der kumulativen Zellzahl beziehungsweise Bromodeoxyuridine (BrdU) Einbau ermittelt. Zusätzliche zur Transfektion wurden die Zellen mit epidermal growth factor (EGF) stimuliert. Eine Überexprimierung von AP-2α in SGHPL-5 Zellen bestätigte diese Resultate, so nahm die Invasion hier um etwa 20% zu. Mein zweites Projekt beschäftigte sich mit der deskriptiven und funktionellen Analyse von a disintegrin and metalloprotease 12 (ADAM-12) während der Invasion von Trophoblasten des ersten Schwangerschaftstrimesters. Zu Beginn verglich ich das Expressionsmuster von ADAM-12 in Terminplazenten, Plazenten des ersten Trimesters, differenzierenden primären Trophoblasten und der Zelllinie SGHPL-5. Anschließend führte ich ADAM-12 Gene-silencing Experimente mit siRNA Oligonukleotiden durch. Daraufhin testete ich den Effekt des Knock-Downs in EVTs auf deren Invasion durch Fibronektin beschichtete Transwells. Als weiteres Modell verwendete ich plazentäre Explantate des ersten Schwangerschaftstrimesters und kultivierte diese auf Rattenschwanzkollagen-1, mit und ohne Knock-down von ADAM-12. Des Weiteren führte ich einen cleavage assay von IGFBP-3 mit Überständen von ADAM-12 defizienten Zellen. Abschließend überexprimierte ich jeweils ADAM-12L und ADAM-12S transient in ADAM-12 negativen SGHPL-5 Zellen und konnte dadurch eine Erhöhung der Invasivität feststellen.
Abstract
(Englisch)
During my PhD, I was investigating how different factors regulate the process of trophoblasts invasion. My first project dealt with the role of AP-2α transcription factor in human trophoblasts invasion. First, I performed descriptive studies to indicate the expression of AP-2α in placental tissue, primary trophoblasts and trophoblast cell lines. Next, I performed loss of function studies using small hairpin microRNA with trophoblastic cell line SGHPL-5. Primary EVTs were treated with small interfering RNA (siRNA) oligonucleotides targeting AP-2α. Invasion assays with the knock-down cells were performed. Proliferation was measured by cumulative cell numbers and by performing bromodeoxyuridine (BrdU) labeling. Additionally, the transfected cells were stimulated during functional assays with epidermal growth factor (EGF). One of the main goals was the identification of AP-2α target genes important for controlling trophoblasts invasiveness. In addition AP-2α was overexpressed in SGHPL-5 cells and invasion assay on matrigel was performed. During my second project, I focused on the descriptive and functional studies of a disintegrin and metalloprotease 12 (ADAM-12) in first trimester trophoblasts invasion. First, I studied the expression pattern of ADAM-12, utilizing first and term placental tissues, differentiating primary trophoblasts and cell line SGHPL-5. Loss of function studies were performed in first trimester isolated EVTs using siRNA oligonucleotides. Next, the functional studies, invasion on fibronectin and proliferation using anti-Ki67 antibody staining of the generated knock-down in primary EVTs and BrdU labeling were done. Additionally, I silenced ADAM-12 in first trimester placental explants cultivated on rat-tail collagen I. Knock-down of ADAM-12 in placental explants demonstrated decrease in EVTs motility when compared to controls. Moreover, the cleavage assay of IGFBP-3 was performed with supernatants from ADAM-12 knock-down cells. Finally, I transiently overexpress ADAM-12L and –S respectively in the ADAM-12 negative SGHPL-5 cell line and performed invasion assay which revealed significant increase in cell invasiveness.

Schlagwörter

Schlagwörter
(Englisch)
placenta-1 AP-2α-2 ADAM-12-3 trophoblast invasion-4 transcription factor-5 pregnancy-6 knock-down-7
Schlagwörter
(Deutsch)
Plazenta-1 AP-2α-2 ADAM-12-3 Trophoblasteninvasion-4 Transkriptionsfaktor-5 Schwangerschaft-6 knock-down-7
Autor*innen
Katarzyna Biadasiewicz
Haupttitel (Englisch)
Regulatory factors controlling invasion of first trimester human trophoblasts
Paralleltitel (Deutsch)
Regulatorische Faktoren während der humanen Trophoblasteninvasion im ersten Triminon
Paralleltitel (Englisch)
Regulatory factors controlling invasion of first trimester human trophoblasts
Publikationsjahr
2013
Umfangsangabe
III, 91 S. : Ill., graph. Darst.
Sprache
Englisch
Beurteiler*innen
Johannes Nimpf ,
Gernot Desoye
Klassifikationen
42 Biologie > 42.13 Molekularbiologie ,
42 Biologie > 42.15 Zellbiologie
AC Nummer
AC11018147
Utheses ID
24348
Studienkennzahl
UA | 091 | 490 | |
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