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Visualization of ApoER2 and Vldlr during the ligand-mediated signal-transduction
Roland Kuttner
Art der Arbeit
Diplomarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Zentrum für Molekulare Biologie
Betreuer*in
Johannes Nimpf
DOI
10.25365/thesis.29934
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-29931.13045.417963-3
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Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Der charakteristische Reeler Phänotyp and der gut verstandene Reelin Signalweg bilden ein lange etabliertes Modellsystem zur Untersuchung der Entwicklung des Gehirns in Säugetieren.
Apolipoprotein E Rezeptor 2 (ApoER2) und Very Low Density Lipoprotein Receptor (Vldlr) sind wichtige Bestandteile des Reelin Signalweges. Das Arbeitsmodel für diesen Signalweg ist, dass nach der Bindung an Reelin durch entweder ApoER2 oder Vldlr, letztere ein Dimer bilden, dann Disabled homolog 1 (Dab1) binden, welches selbst dimerisiert und schließlich phosphoryliert wird.
Im Rahmen dieser Arbeit wurden Zelllinien mit der Expression von Fluoreszenz markierten ApER2 und Vldlr etabliert, um die Mechanismen des Reelin Signalweges. Im speziellen zeigten Hek 293 Zellen mit einer stabilen Expression von TagGFP2 - ApoER2 \ Vldlr Fusionsproteinen die vielversprechendsten Eigenschaften für fluoreszenzmikroskopische Anwendungen.
Mit diesen etablierten Zelllinien konnten spezifesche Interaktionen von fluoreszenzmarkiertem Dab 1 gezeigt werden. Nachdem Dab1 sich mit Vldlr, aber nicht mit ApoER2, in der direkten Umgebung der Zellmembran kolokalisiert.
Des Weiteren wurde die mögliche Dimerisierung oder die Bildung von Clustern der Rezeptoren ApoER2 und Vldlr, während ihrer Interaktion mit Reelin, durch Messung der Anisotropie untersucht. Stimulation mit Reelin verursachte hierbei eine Senkung der Anisotropie in Zellen mit Expression von ApoER2 - TagGFP2 Fusions Proteinen, was auf einen möglichen homo - FRET (Förster-Resonanzenergietransfer), aufgrund der Bildung von Clustern von Rezeptoren hinweist. Diese Ergebnisse konnten jedoch nicht unter Verwendung von Vldlr-TagGFP2 Fusions Protein exprimierenden Zellen nachgewiesen werden.
Abstract
(Englisch)
The characteristic Reeler phenotype and the well studied Reelin signalling pathway are a long established model system for the study of the development of the mammalian brain.
Apolipoprotein E receptor 2 (ApoER2) and very low density lipoprotein receptor (Vldlr) have been shown to be integral parts of the Reelin signalling pathway, as they interact with Reelin and transduce the signal downstream. The working model for the signalling pathway is that upon binding of Reelin to either ApoER2 or Vldlr, the receptors dimerize, bind the intracellular adapter protein Disabled homolog 1 (Dab1) which dimerizes as The characteristic Reeler phenotype and the well studied Reelin signalling pathway are a long established model system for the study of the development of the mammalian brain.
Apolipoprotein E receptor 2 (ApoER2) and very low density lipoprotein receptor (Vldlr) have been shown to be integral parts of the Reelin signalling pathway, as they interact with Reelin and transduce the signal downstream. The working model for the signalling pathway is that upon binding of Reelin to either ApoER2 or Vldlr, the receptors dimerize, bind the intracellular adapter protein Disabled homolog 1 (Dab1) which dimerizes as well and is subsequently phosphorylated.
In this study cell lines expressing fluorescently tagged murine ApoER2 and Vldlr were established, in order to study the mechanisms of the Reelin pathway. Specifically Hek 293 cells with stable expression of TagGFP2 - tagged ApoER2 or Vldlr displayed the most promising properties for fluorescence imaging microscopy applications.
Using these established cell lines distinct interactions of fluorescently tagged Dab1 with ApoER2 and Vldlr were shown. Dab1 colocalizes with Vldlr next to the plasma membrane, but does not do so with ApoER2.
Furthermore the suggested dimerization or clustering of ApoER2 and Vldlr upon the interaction with Reelin was studied using anisotropy imaging. Reelin stimulation caused a decrease in anisotropy in cells expressing ApoER2-TagGFP2 fusion proteins, indicating a homo - FRET (Förster resonance energy transfer) event due to clustering of the fluorescently tagged receptor. However this could not be demonstrated in cells with expression of Vldlr-TagGFP2 fusion proteins.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
ApoER2 Vldlr signal transduction homo FRET anisotropy
Schlagwörter
(Deutsch)
ApoER2 Vldlr Signaltransduktion Homo FRET Anisotropie
Autor*innen
Roland Kuttner
Haupttitel (Englisch)
Visualization of ApoER2 and Vldlr during the ligand-mediated signal-transduction
Paralleltitel (Deutsch)
Visualisierung von ApoER2 und Vldlr während der durch Liganden herbeigeführten Signaltransduktion
Publikationsjahr
2013
Umfangsangabe
52 S. : Ill., graph. Darst.
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Johannes Nimpf
AC Nummer
AC11734851
Utheses ID
26697
Studienkennzahl
UA | 441 | | |