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Construction of different mutants of Natrialba magadii and the influence of different φCh1 ORFs on N. magadii
Léa Schöner
Art der Arbeit
Masterarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Lebenswissenschaften
Betreuer*in
Angela Witte
DOI
10.25365/thesis.30718
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-30029.04415.897664-9
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Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Ein mit Tryptophan induzierbarer Promoter für Nab. magadii wurde unlängst etabliert, jedoch war die Expression von anderen als dem Reporter-Protein BgaH nicht erfolgreich. Ein Grund dafür könnte eine mögliche Degradierung des Inducers Tryptophan sein. Durch Induktion wird nicht nur der ptnaN Promoter induziert, der auf dem Plasmid vorhanden ist, sondern auch der Promoter des Tryptophanase Gens (tnaA) das auf dem Chromosom lokalisiert ist. Daher wird das Enzym Tryptophanase, welches für den Abbau von Tryptophan verantwortlich ist, produziert. Im Rahmen dieser Arbeit wurde das tnaA Gen deletiert. Mittels homologer Rekombination wurde das Gen durch eine Novobiocin Resistenzkassette ersetzt. Der zweite Teil dieser Masterarbeit beschäftigt sich mit ORFs des Virus φCh1 die vermutlich eine regulatorische Funktion während der Virusentwicklung haben. Durch die Entwicklung der Deletionsmutante Nab. magadii L11Δ79 wurden die erste Anzeichen für eine regulatorische Funktion von ORF79 ersichtlich. Verglichen zum Wildtyp Stamm lysiert der Deletionsstamm früher und die Expression von viralen Proteinen ist verändert. Im Rahmen dieser Arbeit wurde der Einfluss von ORF79 auf die Expression von ORF3452 genauer untersucht. Die beiden ORFs wurden in Nab. magadii L13 co-expremiert und es konnte gezeigt werden, dass durch die Induktion von ORF79 Expression die Produktion von gp3452 sinkt. Bioinformatische Vorhersagen schlagen vor, dass der φCh1 ORF56 für einen transkriptionellen Regulator codiert. ORF56 wurde in dem Stamm Nab. magadii L11 exprimiert, was zu einem veränderten Lyse Verhalten geführt hat. Nur eine sehr schwache Form der Lyse konnte für diesen Stamm festgestellt werden, und darüber hinaus ist die Expression von viralen Proteinen stark reduziert.
Abstract
(Englisch)
Recently, a tryptophan inducible promoter for Nab. magadii was established, called ptnaN, but overexpression of proteins other than the reporter protein BgaH failed so far. Upon induction, the promoter of the tryptophanase gene (tnaA) located on the chromosome is induced too leading to expression of tryptophanase, an enzyme that is responsible for the degradation of tryptophan. In course of this study, the tnaA gene was deleted. The second part of this work focuses on the characterization of putative regulators of φCh1. ORF79 encodes a putative regulatory protein. Investigation started with the creation of the deletion mutant Nab. magadii L11Δ79. Compared to the wild type strain an earlier onset of lysis could be observed and it was demonstrated that protein expression of certain φCh1 ORFs is altered in the mutant strain. In course of this study, the putative influence of ORF79 on the expression of ORF3452 was further analyzed. ORF79 and ORF3452 were co-expressed in Nab. magadii L13 and it could be demonstrated that induced expression of ORF79 leads to a decrease in the production of gp3452. Bioinformatic prediction suggests that ORF56 of φCh1 is a putative transcriptional regulator. In course of this study a putative influence of ORF56 on φCh1 development was examined. ORF56 was expressed in the strain Nab. magadii L11 leading to an altered growth behavior. Compared to the wild type strain nearly no lysis could be observed and expression of certain viral proteins is reduced. The obtained data provide first indications for a regulatory function of ORF56.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
Natrialba magadii φCh1 promoters deletion mutant repressors regulators
Schlagwörter
(Deutsch)
Natrialba magadii φCh1 Promotoren Deletionsmutante Repressoren Regulatoren
Autor*innen
Léa Schöner
Haupttitel (Englisch)
Construction of different mutants of Natrialba magadii and the influence of different φCh1 ORFs on N. magadii
Paralleltitel (Deutsch)
Konstruktion verschiedener Mutanten von Natrialba magadii und der Einfluss verschiedener ORFs von φCh1 auf N. magadii
Paralleltitel (Englisch)
Construction of different mutants of Natrialba magadii and the influence of different φCh1 ORFs on N. magadii
Publikationsjahr
2013
Umfangsangabe
104 S. : Ill., graph. Darst.
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Angela Witte
Klassifikation
42 Biologie > 42.30 Mikrobiologie
AC Nummer
AC11830156
Utheses ID
27359
Studienkennzahl
UA | 066 | 830 | |