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Entwicklung von Real Time PCR-Methoden zur Bestimmung von Mandel und Haselnuss in Lebensmitteln
Caroline Leidinger
Art der Arbeit
Diplomarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Lebenswissenschaften
Betreuer*in
Gerhard Sontag
DOI
10.25365/thesis.3296
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-30278.26201.266264-3
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Die vorliegende Diplomarbeit beschreibt die Entwicklung, Optimierung und Validierung einer Singleplex Real Time PCR-Methode zur Bestimmung von potentiell allergener Mandel und einer Duplex Real Time PCR-Methode zur Bestimmung von Mandel und Haselnuss in Lebensmitteln. Zum Entwurf der Primer und TaqMan Sonden wurden die Gensequenzen der Allergene Cor a 1 und Amandin verwendet. Nach der Optimierung der Primerkonzentration wurden die Primer auf Kreuzreaktivität mit Lebensmitteln getestet. Die ausgewählten Primer erwiesen sich als spezifisch für Mandel- bzw. Haselnuss-DNA und zeigten mit keinem der untersuchten Lebensmittel eine Kreuzreaktivität. Die Effizienz der entwickelten Real Time PCR-Methoden wurden mittels seriell verdünnter Mandel- und/oder Haselnuss-DNA ermittelt. Die Effizienz der Singleplex-Methode betrug 99,0%. Nach einer weiteren Optimierung wurde auch mit dem Duplex-Assay eine sehr gute Effizienz (Mandel-Assay 103,7%, Haselnuss-Assay 98,4%) erreicht. Die Nachweisgrenze des optimierten Duplex-Assays betrug 50 pg Mandel- bzw. Haselnuss-DNA. Um die Anwendbarkeit der entwickelten Real Time PCR-Methoden zu prüfen, wurden unter genau definierten Bedingungen hergestellte Modelllebensmittel und kommerziell erhältliche Lebensmittel analysiert. In allen kommerziellen Produkten, bei denen Mandel und/oder Haselnuss auf der Verpackung deklariert war, wurden diese nachgewiesen. Bei der Analyse der Produkte, die laut Verpackungsangabe keine Mandel und/oder Haselnuss enthielten, wurde in allen Fällen ein negatives Ergebnis erhalten. Im Rahmen dieser Diplomarbeit wurden außerdem spezifische Primerpaare zur Bestimmung von potentiell allergener Walnuss und Traube entworfen.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Deutsch)
Real Time Polymerase Kettenreaktion Mandel Haselnuss Allergie Lebensmittelallergene Primer TaqMan Sonde Agarosegelelektrophorese
Autor*innen
Caroline Leidinger
Haupttitel (Deutsch)
Entwicklung von Real Time PCR-Methoden zur Bestimmung von Mandel und Haselnuss in Lebensmitteln
Publikationsjahr
2009
Umfangsangabe
IX, 149 S. : graph. Darst.
Sprache
Deutsch
Beurteiler*in
Gerhard Sontag
Klassifikationen
35 Chemie > 35.23 Analytische Chemie: Allgemeines ,
35 Chemie > 35.65 Nukleinsäuren
AC Nummer
AC07559326
Utheses ID
2884
Studienkennzahl
UA | 474 | | |