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Establishment of a cell culture assay to measure NMDA-receptor-inhibitors
Jakob-Felix Mayrhofer
Art der Arbeit
Diplomarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Lebenswissenschaften
Studiumsbezeichnung bzw. Universitätlehrgang (ULG)
Diplomstudium Pharmazie
Betreuer*in
Ernst Urban
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-30368.89288.836766-0
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Die Aufgabenstellung dieser Arbeit war es, einen Zellkulturtest zu etablieren, womit ein rasches Feststellen der Wirkung einer Substanz auf den N-Methyl-D-Aspartat-Rezeptor (NMDAR) ermöglicht werden sollte. Für die Messung wurden HEK293 Zellen verwendet, die nach Zugabe von Tetracyclin einen funktionellen NMDAR exprimieren, was ohne Zusatz von NMDAR-Inhibitoren unweigerlich zum Zelltod führt.
Unter Verwendung eines LDH-Tests wurde letztendlich ein ausreichend großes Messfenster erreicht, um die konzentrationsabhängige Aufhebung des Zellschadens durch die verabreichten Testsubstanzen nachweisen zu können.
Für die Qualifizierung des Assays wurden als Referenzsubstanzen zwei NMDAR-Kanalblocker (MK-801 und Memantin) und ein Glycinantagonist (L-701,324) getestet. Zusätzlich wurden zahlreiche neuartige Antagonisten und einige Substanzen, bei denen der Verdacht besteht, dass sie eine Wirkung auf den NMDA-Rezeptor haben, getestet. Die Ergebnisse der Referenzsubstanzen und der neuartigen Antagonisten wurden mit Ergebnissen aus der Literatur verglichen. Zusätzlich wurde mit der Korrelation der Ki- und IC50-Werte der Antagonisten aus der Literatur mit den IC50-Werten der Antagonisten dieser Arbeit eine weitere Qualifizierung des Tests vorgenommen. Die Ergebnisse und die Korrelationen mit Literaturdaten bestätigten die Qualität des Testsystems, welches in dieser Arbeit etabliert wurde.
Darüber hinaus wurde überprüft, ob die Bindung einer Substanz an den NMDAR beziehungsweise dessen Wirkung auf eine Tetrazyklin-induzierte NMDAR-Überaktivierung in direktem Zusammenhang mit ihrer Lipophilie steht. Somit wurden Lipophilie-Parameter (ClogP, MlogP, logPTsar) mit Ki-Werten aus der Literatur beziehungsweise mit IC50-Werten aus dieser Arbeit korreliert. Die Ergebnisse zeigten, dass die Lipophilie tatsächlich ein ausschlaggebender Faktor, sowohl was die NMDAR-Bindung, als auch die NMDAR-Blockade betrifft, ist.
Schließlich wurden in dieser Arbeit noch die Ergebnisse der Substanzen, bei denen der Verdacht einer Wirkung auf den NMDAR bestand, mit Resultaten anderer Studien verglichen. Unter jenen Substanzen gelang es lediglich Honokiol im etablierten Testsystem dieser Arbeit den TC-induzierten Zellschaden signifikant zu minimieren.
Zusammenfassend wurde ein auf NMDAR-Funktionalität basierender Test zur Überprüfung der Wirkung von potentiellen NMDAR-Inhibitoren etabliert, der für zukünftige präklinische Untersuchungen eingesetzt werden kann.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Deutsch)
NMDAR NMDAR-Inhibitoren HEK-Zellen
Autor*innen
Jakob-Felix Mayrhofer
Haupttitel (Deutsch)
Establishment of a cell culture assay to measure NMDA-receptor-inhibitors
Paralleltitel (Deutsch)
Etablierund eines Zellkulturtests zur Messung von NMDA-Rezeptor-Inhibitoren
Paralleltitel (Englisch)
Establishment of a cell culture assay to measure NMDA-receptor-inhibitors
Publikationsjahr
2015
Umfangsangabe
152 S.
Sprache
Deutsch
Beurteiler*in
Ernst Urban
Klassifikation
44 Medizin > 44.42 Pharmazeutische Chemie
AC Nummer
AC12222257
Utheses ID
32419
Studienkennzahl
UA | 449 | | |