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Molecular cross-talk of the Src-family tyrosine kinase YES-1 with the Hippo pathway contributes to survival and proliferation of hepatocellular carcinoma cells
Katharina Ehrenhöfer
Art der Arbeit
Masterarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Zentrum für Molekulare Biologie
Studiumsbezeichnung bzw. Universitätlehrgang (ULG)
Masterstudium Molekulare Biologie
Betreuer*in
Wolfgang Sommergruber
DOI
10.25365/thesis.36734
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-29395.67554.463661-3
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Ziel des Projektes war, die Rolle der Kinase YES-1 im Hippo Signaltransduktionsweg in Leberkarzinomzelllinien zu charakterisieren. Die Hypothese beruhte auf der Annahme, dass YES-1 eine essentielle Rolle bei der Aktivierung der YAP/TEAD (Transkriptionsfaktoren des Hippo-Signaltransduktionsweges) abhängigen Expression im Leberkarzinom spielt. Um dies zu testen, wurde ein RNAi-vermittleter „Knockdown“ der Gene des Hippo Signalweges als auch von YES-1 selbst durchgeführt und der Effekt auf die Proliferation analysiert. Die Hälfte der behandelten Zelllinien zeigte Sensitivität gegenüber RNAi-vermittelter YES-1 Runterregulierung. Der anti-proliferative Effekt konnte durch Überexpression einer RNAi-resistenten Variante von wt-YES-1 aufgehoben werden. YES-1 wurde sowohl im Zytoplasma als auch im Nukleus detektiert, wobei zunächst kein Zusammenhang zwischen der sub-zellulären Lokalisation von Proteinen des Hippo Signalweges und der direkten Aktivierung durch YES-1 hergestellt werden konnte. Interessanterweise wiesen alle YES-1 überexprimierenden Zellen eine Hochregulierung von LATS1, einer zentralen Kinase im Hippo Signalweg, auf. Mit Hilfe von Ko-Immunpräzipitation wurde eindeutig eine Interaktion zwischen YES-1 einerseits und YAP und TEAD andererseits nachgewiesen. Mittels eines YAP/TEAD abhängigen Reportergensystems, das auf der Promotorsequenz des CTGF (“connective tissue growth factor“; Zielgen von YAP/TEAD) basierte, konnte die Aktivierung nach transienter YES-1 Expression bzw. Deaktivierung nach YES-1 „Knockdown“ beobachtet werden. Der Einsatz niedermolekularer Verbindungen wie Dasatinib (Inhibitor von YES-1) und Verteporfin (Inhibitor der YAP::TEAD Interaktion) als auch die Verwendung YAP::TEAD Interaktion inhibierender Peptide, zeigte erfolgreiche Deaktivierung des Reporters. Für diese Verbindungen wurden die EC50 Werte bestimmt. Die im Zuge der Arbeit generierten Daten lassen die Schlussfolgerung zu, dass YES-1 eine essentielle Rolle in der YAP/TEAD-abhängigen Aktivierung der Transkription spielt.
Abstract
(Englisch)
The project aimed at the elucidation of the contribution of the SRC-like kinase YES-1 to the tumorigenesis of hepatocellular carcinoma (HCC). The working hypothesis implied that YES-1 plays an essential role in the activation of the YAP/TEAD-driven expression. RNAi-mediated knockdown of genes of the Hippo pathway and YES-1 was correlated with sensitivity. Half of HCC lines tested were shown to be sensitive towards YES-1 knockdown including a rescue from the anti-proliferative effect by over-expression of RNAi-resistant wt-YES-1 but not by the kinase dead YES-1. The kinase was found to be located in the cytoplasm as well as in the nucleus. No prediction about dependency on YES-1 could be made based on the intracellular distribution pattern of YES-1 and other Hippo proteins. Interestingly, LATS1, a core kinase of the Hippo pathway, was found to be up-regulated in cells which were dependent on YES-1. An interaction between YES-1, YAP and TEADs could be demonstrated via co-immunoprecipitation. By using a YAP/TEAD dependent reporter gene assay based on the CTGF promoter (“connective tissue growth factor”; target gene of YAP/TEAD), activation of the reporter gene could be shown after transiently expressing YES-1 or deactivation after YES-1 knockdown, respectively. The application of small-molecule inhibitors like Dasatinib (inhibitor of YES-1) and Verteporfin (inhibitor of YAP::TEAD) as well as YAP::TEAD interaction inhibiting peptides exhibited an impaired reporter gene activity. IC50 values of these compounds were determined and correlated with genomic analyses. In conclusion, YES-1 kinase plays an essential role in YAP/TEAD-dependent activation of transcription.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
Hippo pathway YES-1 YAP TEAD Hepatocellular Carcinoma
Schlagwörter
(Deutsch)
Hippo Signalweg YES-1 YAP TEAD Hepatozelluläres Karzinom
Autor*innen
Katharina Ehrenhöfer
Haupttitel (Englisch)
Molecular cross-talk of the Src-family tyrosine kinase YES-1 with the Hippo pathway contributes to survival and proliferation of hepatocellular carcinoma cells
Paralleltitel (Deutsch)
Molekularer "Cross-talk" von YES-1, einer Src-Kinase, mit dem Hippo Signalweg trägt zur Proliferation hepatozellulärer Karzinomzelllinien bei
Publikationsjahr
2015
Umfangsangabe
148 S.
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Wolfgang Sommergruber
Klassifikation
42 Biologie > 42.13 Molekularbiologie
AC Nummer
AC12258248
Utheses ID
32562
Studienkennzahl
UA | 066 | 834 | |