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Towards a complex of the mycobacterial proteasome
Matthias Langer
Art der Arbeit
Masterarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Zentrum für Molekulare Biologie
Studiumsbezeichnung bzw. Universitätlehrgang (ULG)
Masterstudium Molekulare Biologie
Betreuer*in
Tim Clausen
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-30156.11237.134359-2
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Für das langfristige Überleben von M. tuberculosis im Wirt ist das Proteasom essentiell, wahrscheinlich sowohl durch den Abbau von Proteinen, die durch reaktive Stickstoffspezies beschädigt wurden als auch durch einen bisher unbekannten Prozeß. Das Proteasom ist daher ein vielversprechendes Ziel für zukünftige Anti-Tuberkulosemedikamente. Die Struktur des mycobakteriellen Protasoms ist nur teilweise geklärt, wobei die des zentralen proteolytischen Komplexes (dem core particle, CP) gut erforscht ist, die der apikalen AAA+-ATPase Mpa, besonders an den Bindungsstellen zu CP, weniger. Die Prozesse bei der Assemblierung des Mpa-CP-Komplexes sind ebenfalls nicht vollständig bekannt. Studien zeigten daß Mpa direkt an CP weder in vivo noch in vitro bindet, was die Existenz eines zusätzlichen, unidentifizierten Faktors nahelegt. Diese Arbeit versuchte, Konditionen, in denen sich der Mpa-CP-Komplex zusammenfügt und stabil bleibt, zu klären.
Photocrosslinking-Experimente mit Peptiden, die der C-terminalen CP-bindenden Domäne von Mpa entsprachen sowie mit dem kompletten Mpa-Protein, die beide die photoreaktive Aminosäure p-Benzoylphenylalanin enthielten, zeigten, daß die Interaktion zwischen Mpa und CP verläßlich in vitro reproduziert werden kann. Der Einfluß des Crosslinks auf die Entfaltungsfähigkeit von Mpa, die Proteaseaktivität des CPs, sowie die Frage, ob Mpa und CP in vivo aneinander binden, wurden ebenfalls untersucht. Die Ergebnisse deuten darauf hin daß die Bindung von Mpa und CP in vivo unter den verwendeten Bedingnungen nicht stattfindet und möglicherweise von einem zusätzlichen unbekannten, mit Mpa und/oder dem core particle interagierenden Faktor abhängt.
Abstract
(Englisch)
For long-term survival in the host, the proteasome of M. tuberculosis has been shown to be essential, likely through the removal of proteins damaged by reactive nitrogen species as well as by some as-yet unknown mechanism. This makes the mycobacterial proteasome a promising target for future anti-tuberculosis drugs. Its structure has only been partially resolved, with that of the central proteolytic complex (the core particle, CP) being well-understood but that of the apical AAA-ATPase Mpa/ARC, especially where it binds to CP, less so. The assembly of the complex is unclear as well. Previous studies have shown that Mpa does not bind to CP either in vitro or in vivo, suggesting that there must be some additional unidentified factor. This study attempted to clarify the conditions in which the complex assembles and remains stable.
Photocrosslinking experiments with peptides equivalent to the C-terminal CP-binding domain of Mpa as well as the full length Mpa protein, both containing the photoreactive amino acid p-Benzoylphenylalanine, showed that the interaction between Mpa and CP can be reliably reproduced in vitro. Further experiments were conducted to test whether the crosslinking of the complex would influence either the unfoldase activity of Mpa or the proteolytic activity of CP, as well as whether Mpa and CP would bind in vivo. The results indicate that binding does not occur in vivo under the chosen conditions and could depend on an additional, unidentified factor interacting with Mpa and/or the core particle.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
Tuberculosis Mycobacterium proteasome Mpa mycobacterial proteasome ATPase CP core particle PafA Pup
Schlagwörter
(Deutsch)
Tuberkulose Mycobacterium Proteasom Mpa mycobacterial proteasome ATPase CP core particle PafA Pup
Autor*innen
Matthias Langer
Haupttitel (Englisch)
Towards a complex of the mycobacterial proteasome
Paralleltitel (Deutsch)
Auf dem Weg zu einem Komplex des mycobakteriellen Proteasoms
Publikationsjahr
2015
Umfangsangabe
172 S.
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Sonja Schitter-Sollner
Klassifikation
42 Biologie > 42.13 Molekularbiologie
AC Nummer
AC12306227
Utheses ID
33555
Studienkennzahl
UA | 066 | 834 | |