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TNF-alpha induced activation of different ENaC-subunit combinations in a heterologous expression system
Franziska Poser
Art der Arbeit
Diplomarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Lebenswissenschaften
Studiumsbezeichnung bzw. Universitätlehrgang (ULG)
Diplomstudium Pharmazie
Betreuer*in
Rosa Lemmens
DOI
10.25365/thesis.38387
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-29597.64907.312062-8
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Lungenödeme entstehen durch ein Ungleichgewicht der alveolären Flüssigkeitsclearance. Dieses entsteht durch einen gestörten Natriumtransport durch den epithelialen Natriumkanal (ENaC), der dabei eine wesentliche Rolle spielt und Flüssigkeitshaushalt der Lunge reguliert.
Deshalb ist eine verstärkte Aktivität dieses Kanals eine aussichtsreiche Therapieoption bei Lungenödem.
Zusätzlich besitzt TNF-α einen zweiseitigen Effekt auf die alveoläre Flüssigkeitsclearance. Durch TNF-α, insbesondere seiner Lectin-ähnlichen Domäne, kann diese Clearance durch eine Stimulation des ENaCs verbessert werden.
Es wurde gezeigt, dass AP301, ein zyklisches Peptid, welches die Lectin-ähnlichen Domäne nachahmt, den Amilorid-sensitiven Stromfluss in heterologen Expressionssystemen erhöht. Dies geschieht allerdings in Abhängigkeit der vorhandenen Untereinheiten von ENaC.
Mittels der Patch-Clamp Technik wurde der Einfluss von TNF-α auf die α-, β-, γ- sowie δ-Untereinheit von ENaC in transient transfektierten HEK-293 Zellen untersucht.
Die Versuche zeigen, dass TNF-α den Amilorid-sensitiven Stromfluss in Abhängigkeit der vorhandenen Untereinheit erhöht. So liegt die mittlere effektive Konzentration (EC50) von TNF-α bei der α-Untereinheit des ENaCs bei 4,2 nM und die der δ-Untereinheit bei 5 nM. Bei der β-Untereinheit dagegen ist die EC50 mit 18,8 nM vier- bis fünfmal höher, während bei der γ-Untereinheit mit TNF-α keine Wirkung festgestellt werden konnte.
Abstract
(Englisch)
Pulmonary oedema are developed due to an imbalance of the alveolar liquid clearance. This is due to a disturbed sodium transport by the epithelial sodium channel (ENaC) which plays a basic role thereby and regulates the fluid balance of the lung.
Hence an enhanced activity of this channel is a promising therapy option.
In addition TNF-α has two opposing effects on the alveolar liquid clearance. TNF-α, particularly its lectin-like domain, is able to activate ENaC and so to improve that clearance.
It was shown that AP301, a cyclic peptide mimicking the lectin-like domain of TNF-α, increases the amiloride-sensitive sodium current in heterologous expression systems. Though this depends according to the present subunits of ENaC.
Using the patch-clamp-technique the effect of TNF-α was analysed on the α-, β-, γ- and δ-subunit of ENaC in transiently transfected HEK-293 cells.
The experiments show that TNF-α enhances the amiloride-sensitive current due to the present subunit. Thus the half maximal effective concentration (EC50) of TNF-α is 4.2 nM for α-ENaC and 5 nM for δ-ENaC. In contrast the EC50 of β-ENaC is with 18.8 nM four to five times higher whereas no effect is determined with TNF-α at γ-ENaC.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
ENaC TNF-alpha Patch-Clamp
Schlagwörter
(Deutsch)
ENaC TNF-alpha Patch-Clamp
Autor*innen
Franziska Poser
Haupttitel (Englisch)
TNF-alpha induced activation of different ENaC-subunit combinations in a heterologous expression system
Paralleltitel (Deutsch)
TNF-alpha induzierte Aktivierung verschiedener ENaC-Untereinheit-Kombinationen in einem heterologen Expressionssystem
Publikationsjahr
2015
Umfangsangabe
38 S. : Ill., graph. Darst.
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Rosa Lemmens
Klassifikation
30 Naturwissenschaften allgemein > 30.00 Naturwissenschaften allgemein: Allgemeines
AC Nummer
AC12631316
Utheses ID
34007
Studienkennzahl
UA | 449 | | |