Detailansicht
Influenza B NS1 truncation mutants
a live attenuated vaccine approach
Nina Wressnigg
Art der Arbeit
Dissertation
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Lebenswissenschaften
Betreuer*in
Thomas Muster
DOI
10.25365/thesis.3953
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-29523.65097.633160-5
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Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Das Ziel der Doktorarbeit war die Etablierung von mutanten, replikations-inkompetenten Influenza B Viren mit beeintraechtigter Interferon antagonistischer Funktion zur Verwendung als lebend - attenuierter Impfstoff. Wir erzeugten verschiedene Influenza B Viren mit einerseits carboxy-terminal verkürzten NS1 Proteinen unterschiedlicher Länge oder andererseits mit komplett fehlendem NS1 ORF (delNS1-B) durch Reverse Genetik auf Vero Zellen. Aufgrund einer einzelnen Aminosäure Mutation (M86V) in dem Influenza B M1 Protein konnte das virale Wachstum in Vero Zellen erhöht werden, infolgedessen es erst möglich wurde einen delNS1-B Virus herzustellen, der zu Titern von über 8 logs wächst. Alle Viren zeigen eingeschränktes Wachstum in humanen alveolaren epithelial Zellen (A549) und in 6 Tage alten humanen Makrophagen. Der attenuierte Phänotyp der Viren ist assoziiert mit der Induktion von antiviralen (IFN-alpha) und pro-inflammatorischen Cytokinen (TNF-alpha, IL-6 and IL-1beta) früh nach der Infektion. Alle Vakzine Kandidaten waren replikations - inkompetent, riefen keine klinischen Symptome in Mäusen und Frettchen hervor und induzierten eine neutralisierende Antikörper Antwort. Nach einer einzigen intranasalen Immunisierung wurde ein vollständiger Schutz vor einer homologen Challenge mit einem wildtyp Virus erreicht. Da es bisher keine delNS1-B Virus Komponente gab, die zu hohen Titern in der Zellkultur wächst, war die Möglichkeit der Formulierung einer trivalenten Vakzine basierend auf der Deletion des wesentlichen Interferon Antagonisten restriktiv. Unsere Studie schliesst diese Lücke und ebnet den Weg für die klinische Evaluierung einer saisonalen, trivalenten, lebend-attenuierten, replikations inkompetenten und intranasalen delNS1 Influenza Vakzine.
Abstract
(Englisch)
The aim of the thesis is to investigate the potential use of mutant replication deficient influenza B viruses with impaired interferon antagonistic function as live attenuated vaccines. We generated several influenza B viruses containing either carboxy-terminal truncated NS1 proteins of different length or completely lacking the NS1 ORF (delNS1-B) employing reverse genetics on Vero cells. Due to a unique, single amino acid mutation M86V in the influenza B M1 protein viral growth in Vero cells was increased, enabling the rescue of a delNS1-B virus growing to titers of 8 logs. All viruses showed restricted growth in human alveolar epithelial cells (A549) and in 6 day old human macrophages. The attenuated phenotype of the viruses was associated with induction of antiviral (IFN-alpha) and pro-inflammatory cytokines (TNF-alpha, IL-6 and IL-1 beta) early after infection. All vaccine candidates were replication deficient, did not provoke any clinical symptoms and induced neutralizing antibody response in mice and ferrets. Complete protection against homologous challenge with wild-type virus was accomplished after a single intranasal immunization. So far, the lack of a delNS1-B virus component growing to high titers in cell culture has been limiting the possibility to formulate a trivalent vaccine based on deletion of the major interferon antagonist. Our study closes this gap and paves the way for the clinical evaluation of a seasonal, trivalent, live replication-defective delNS1 intranasal influenza vaccine.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
Influenza vaccine Influenza B NS1 live-attenuated mucosal immunization truncation mutants delNS1
Schlagwörter
(Deutsch)
Influenza Vakzine Influenza B NS1 live-atlebenattenuiert mucosale Immunisiereung Deletionsmutanten delNS1
Autor*innen
Nina Wressnigg
Haupttitel (Englisch)
Influenza B NS1 truncation mutants
Hauptuntertitel (Englisch)
a live attenuated vaccine approach
Paralleltitel (Deutsch)
Influenza B NS1 Deletionsmutanten
Publikationsjahr
2008
Umfangsangabe
83 S. : Ill., graph. Darst.
Sprache
Englisch
Beurteiler*innen
Thomas Muster ,
Jindrich Cinatl
Klassifikationen
42 Biologie > 42.13 Molekularbiologie ,
42 Biologie > 42.32 Virologie
AC Nummer
AC05039829
Utheses ID
3485
Studienkennzahl
UA | 091 | 441 | |