Detailansicht
The Influence of Lamina-Associated Polypeptide 2α on the Assembly Properties of A-type Lamins
Elisabeth Zier
Art der Arbeit
Masterarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Zentrum für Molekulare Biologie
Studiumsbezeichnung bzw. Universitätlehrgang (ULG)
Masterstudium Molekulare Biologie
Betreuer*in
Roland Foisner
DOI
10.25365/thesis.39666
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-30406.60636.855070-6
Link zu u:search
(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Lamine sind die Hauptkomponenten der nukleären Lamina. Sie werden in A- und B-Typ Lamine eingeteilt. A-Type Lamine (Lamin A und C) lassen sich, in einem dynamischeren Zustand, auch im Kerninnern nachweisen, wo sie wichtige Funktionen in Chromatin-Organisation und der Regulation zellulärer Prozesse erfüllen. Lamin-assoziiertes Polypeptid (LAP) 2α wurde als spezifischer Bindungspartner von Laminen identifiziert. Es spielt eine essentielle Rolle in der Aufrechterhaltung dieses löslichen Lamin A/C Pools im Nukleoplasma, vermutlich durch Lamin A/C-LAP2α Komplexbildung. Ein erster Ansatz war es die Mengen und das molekulare Verhältnis von Lamin A/C zu LAP2α innerhalb einer Zelle zu bestimmen. Es zeigte sich, dass die Mengen beider Proteine im Kerninneren auf eine molekulare Stöchiometrie innerhalb eines Lamin A/C-LAP2α Komplexes von 15:1 in hTERT-BJ1, 2:1 in HeLa und 1:1 in U2OS Zellen hinweisen. Der zweite Teil meiner Arbeit untersuchte den Einfluss von LAP2α auf die Assemblierung von Lamin A in vitro. Analyse durch Sucrose-Dichtegradientenzentrifugation wies eine Lamin A-LAP2α Interaktion unter Hochsalzbedingungen nach. Unter Assemblierungsbedingungen zeigte sich ein negativer Einfluss von LAP2α auf die Bildung größerer Lamin-Strukturen. Untersuchungen von Lamin-Parakristallen im Elektronenmikroskop zeigten Veränderungen der Kristallstruktur in der Gegenwart von LAP2α. Weiters ergab die Sucrose-Dichtegradientenzentrifugation ein molekulares Verhältnis von Lamin A zu LAP2α in einem Komplex von 1:1. Zusammengefasst weisen meine Daten auf die Existenz von äquimolaren Lamin A-LAP2α Komplexen im Zellkern hin und stellen, zum ersten Mal, einen negativen Einfluss von LAP2α auf Lamin A-Assemblierung dar.
Abstract
(Englisch)
Lamins are components of the nuclear lamina. They are grouped into A- and B-type lamins. Particularly A-type lamins (lamin A and C) are found in a dynamic state within the nucleoplasm and may serve important functions in chromatin organization and regulation of cellular processes. Lamina-associated polypeptide (LAP) 2α is a specific binding partner of lamins. It has an essential role in keeping lamin A/C soluble in the nucleoplasm, most likely by forming a lamin A/C- LAP2α complex. A first aim was to determine the abundances and the molecular ratio of lamin A/C versus LAP2α within a cell. The amounts in the nuclear interior suggest a potential molecular stoichiometry within a lamin A/C- LAP2α complex from 15:1 in hTERT-BJ1 to 2:1 in HeLa and 1:1 in U2OS cells. The second part of my work investigates the interfering effect of LAP2α on lamin A assembly in vitro. Sucrose density gradient centrifugation analysis provided evidence for a lamin A-LAP2α interaction at non-assembly conditions and revealed a negative impact of LAP2α on the formation of larger lamin structures at assembly conditions. This was supported by electron microscopy depicting structural changes in lamin paracrystals in the presence versus absence of LAP2α. Furthermore, sucrose density gradient centrifugation revealed a molecular ratio of lamin A to LAP2α of 1:1 within the complex in vitro. These data lend support for the existence of an equimolar lamin A-LAP2α complex in the nucleus and show for the first time a negative impact of LAP2α on lamin A assembly.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
Intermediate filaments Lamins Lamin assembly Lamina Nucleus Lamina-associated polypeptide 2 LEM-proteins
Schlagwörter
(Deutsch)
Intermediärfilamente Lamine Lamin-Assemblierung Lamina Zellkern Lamina-assoziiertes Polypeptid 2 LEM-Proteine
Autor*innen
Elisabeth Zier
Haupttitel (Englisch)
The Influence of Lamina-Associated Polypeptide 2α on the Assembly Properties of A-type Lamins
Paralleltitel (Deutsch)
Der Einfluss von Lamina-assoziiertem Polypeptid 2α auf Assemblierungseigenschaften von Typ A Laminen
Publikationsjahr
2015
Umfangsangabe
78 Seiten : Illustrationen, Diagramme
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Roland Foisner
Klassifikation
42 Biologie > 42.13 Molekularbiologie
AC Nummer
AC13010289
Utheses ID
35133
Studienkennzahl
UA | 066 | 834 | |