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Effects of miR-181a knockdown on human dendritic cell differentiation and maturation
Johann Romberger
Art der Arbeit
Masterarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Zentrum für Molekulare Biologie
Studiumsbezeichnung bzw. Universitätlehrgang (ULG)
Masterstudium Molekulare Biologie
Betreuer*in
Herbert Strobl
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Alle Rechte vorbehalten / All rights reserved
DOI
10.25365/thesis.41608
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-24217.45573.563060-5
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Abstracts

Abstract
(Deutsch)
Durch Analyse von microRNA-Expressionsmustern in blutbildendem Gewebe konnten mehrere für die Hämatopoese sowie die Funktion des Immunsystems wichtige microRNAs identifiziert werden. MicroRNA-181a (miR-181a) gehört zu diesen Kandidatengenen, und es konnte bereits gezeigt mwerden, dass sie durch Modulation der T-Zell-Rezeptor-Aktivität eine kritische Rolle in der Differenzierung und Reifung von T-Zellen spielt. Des Weiteren konnte bei systemischer Inflammation im Mausmodell eine Runterregulierung der miR-181a-Expression in Lymphozyten beobachtet werden. Diese Ergebnisse implizieren eine wichtige Funktion für miR-181a in der Immunhomöostase, vor allem in der Steuerung der inflammatorischen Antwort auf Pathogene. In Bezug auf diese vorherigen Ergebnisse wollen wir die Rolle von miR-181a in humanen Lymphozyten und speziell in humanen dentritischen Zellen, den primären antigenpräsentierenden Zellen des Immunsystems, aufklären. Wir beabsichtigen dabei, mit einer anti-miR181a-shRNA via lentiviraler Transfektion die Expression von miR-181a in hämatopoetischen CD34-positiven Stammzellen aus humanem Nabelschnurblut stabil zu unterdrücken. Die dabei gewonnenen Stammzellen sollen zu dendritischen Zellen differenziert werden, um die Effekte des Verlusts der miR-181a- Expression sowohl auf die Differenzierung der Zellen als auch auf die Maturation nach mikrobieller Stimulation zu untersuchen. Vorläufige Ergebnisse deuten bereits darauf hin, dass der Verlust von miR-181a in dendritischen Zellen eine Erhöhung der co-stimulatorischen Oberflächenmarker, gesteigerte Zytokinproduktion sowie eine höhere Sensitivität der Zellen gegenüber bakteriellem Lipopolysaccharid nach sich zieht. Wir beabsichtigen daher, durch Analyse des mit dem Verlust von miR-181a einhergehenden Phänotyps betreffend co-stimulatorischer Marker, Zytokinproduktion und Zellmigration sowie durch die Etablierung einer Liste immunrelevanter Zielgene für miR-181a die Mechanismen aufzuklären, welche es miR-181a erlauben, die Homöostase der Immunantwort auf der initialen Stufe der Antigenerkennung- und präsentation durch dendritische Zellen zu regulieren.
Abstract
(Englisch)
Analysis of hematopoietic tissue microRNA expression patterns has identified several microRNAs crucial in hematopoiesis and immune response. Among these, microRNA-181a (miR-181a) has been shown to play a pivotal role in immune cell differentiation and maturation, modulating the sensitivity of T cells against antigens both during differentiation as well as in their mature state. Additionally, downregulation of miR-181a expression in lymphocytes observed during systemic inflammation in mice implicates that miR-181a might be a crucial regulator in the homeostatic response to inflammatory stimuli. Therefore, we intend to examine the effects of miR-181a on human lymphocytes, focusing our attention on dendritic cells, one of the main antigenpresenting cells (APC) of the immune system. Utilizing an HIV-1 derived lentiviral delivery vector, we will perform a knockdown of miR-181a in human CD34+ hematopoietic stem cell-derived DCs by miR-181a antisense construct shRNA, subsequently studying the effect of miR-181a loss on DC differentiation and maturation in response to microbial stimulus. Preliminary analysis of these miR-181a knockdown DCs shows phenotypic differences like increased co-stimulatory surface markers and cytokine secretion besides a higher sensitivity to bacterial lipopolysaccharide stimulation. By examining the phenotypic changes in regards to surface marker expression, cytokine production and cell migration produced upon miR-181a knockdown and by establishing a list of immune-relevant target genes for our microRNA of interest we thus aim to elucidate the mechanisms by which miR- 181a may govern immune homeostasis on the initial level of antigen recognition and presentation by dendritic cells.

Schlagwörter

Schlagwörter
(Englisch)
dendritic cells miR-181a knockdown differentiation maturation cell migration human hematopoiesis
Schlagwörter
(Deutsch)
dendritische Zellen miR-181a Knockdown Differenzierung Maturation Zellmigration humane Hämatopoese
Autor*innen
Johann Romberger
Haupttitel (Englisch)
Effects of miR-181a knockdown on human dendritic cell differentiation and maturation
Paralleltitel (Deutsch)
microRNA-181a knockdown und dessen Effekte auf die Differenzierung und Maturation humaner dendritischer Zellen
Publikationsjahr
2016
Umfangsangabe
IV, 47 Seiten : Illustrationen, Diagramme
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Herbert Strobl
Klassifikationen
42 Biologie > 42.13 Molekularbiologie ,
44 Medizin > 44.45 Immunologie
AC Nummer
AC13112276
Utheses ID
36830
Studienkennzahl
UA | 066 | 834 | |
Universität Wien, Universitätsbibliothek, 1010 Wien, Universitätsring 1