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Investigating the specificity of human rhinoviruses 2A proteinases
Carla Sousa
Art der Arbeit
Dissertation
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Lebenswissenschaften
Betreuer*in
Tim Skern
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Alle Rechte vorbehalten / All rights reserved
DOI
10.25365/thesis.508
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-30339.58890.749664-7
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Abstracts

Abstract
(Deutsch)
Die Familie der Picornaviridae besteht aus unbehüllten Viren mit einer einzelsträngigen, linearen RNA positiver Polarität als Genom. Die rhinovirale 2A-Proteinase führt den 1. Schnitt am Polyprotein durch. Außerdem schneide sie den eukaryotischen Initiationsfaktor (eIF) 4G. Dieser bringt die zelluläre gecappte mRNA und die Ribosomen zusammen. Die über 100 Serotypen der Rhinoviren werden in 2 Gruppen geteilt, wobei das Ausmaß der Übereinstimmung der beiden Gruppen A und B variabel ist. 2Apro von HRV2 (Gruppe A) und HRV14 (Gruppe B) sind zum Beispiel nur zu 40% identisch. Zusätzlich zeigen sie unterschiedliche kinetische Eigenschaften beim Spalten des eiF4G. Die Kristallstruktur von HRV2 2Apro half jene Reste zu identifizieren, die in die Spezifität der HRV2 2Apro involviert sind. Durch die geringe Sequenzübereinstimmung zwischen den Proteasen der beiden Gruppen kann diese Kristallstruktur aber nur bedingt für die HRV14 2Apro angewendet werden. Daher purifizierten wir HRV14 2Apro mit dem Ziel, ihre Kristallstruktur zu bestimmen. Weiters wollten wir neue zelluläre Bindungspartner de HRV 2Apro bestimmen. Dazu komplexierten wir zelluläre Proteine mit HRV 2Apro, purifizierten und identifizierten sie mittels Massenspektroskopie. Um mehr über die Interaktion von viralen Proteasen mit eIF4G zu erfahren, purifizierten wir jene Domaine of eIF4GII die die Spaltungstellen der HRV2 2Apro, der Leaderproteinase des Maul- und Klauensäuchevirus und die Bindungsstelle für eIF4E (cap bindendes Protein) enthält.
Abstract
(Englisch)
The picornavirus family is composed of small, non-enveloped viruses which contain a single stranded RNA genome of positive polarity. The viral 2A proteinase executes the first cleavage on the polyprotein. 2Apro also cleaves the eukaryotic initiation factor (eIF) 4G. eIF4G is a scaffolding protein that brings together the cellular capped mRNA and the ribosomes. There are more than 100 serotypes of rhinoviruses divided in two genetic groups. The level of sequence identity between the groups A and B is variable. For example, there is only 40% amino acid identity between the 2Apro of HRV2 (group A) and HRV14 (group B). However, these proteins present different kinetics when cleaving the cellular substrate eIF4G. The crystal structure of HRV2 2Apro helped to identify the residues involved in HRV2 2Apro specificity. However, the low level of amino acid identity between HRV2 2Apro and HRV14 2Apro limited the use of this crystal structure for HRV14 2Apro. Therefore, we purified HRV14 2Apro with the objective of solving its crystal structure. We also wanted to identify new cellular binding partners of 2Apro. To this end, we used a proteomics approach in which cellular proteins complexed with 2Apro were purified and identified by mass spectroscopy. To know more about the interaction of viral proteinases with eIF4G, we purified a domain of eIF4GII containing the cleavage sites for HRV2 2Apro and the leader proteinase of FMDV and the binding site for eIF4E. The ultimate aim was to determine the crystal NMR structures of this fragment.

Schlagwörter

Schlagwörter
(Englisch)
HRV 2A proteinases Virology Structure
Schlagwörter
(Deutsch)
HRV 2A Proteinasen Virologie Struktur
Autor*innen
Carla Sousa
Haupttitel (Englisch)
Investigating the specificity of human rhinoviruses 2A proteinases
Paralleltitel (Deutsch)
Untersuchung der Spezifität von 2A Proteinasen humaner Rhinoviren
Publikationsjahr
2008
Umfangsangabe
147, XIII S. : Ill., graph. Darst.
Sprache
Englisch
Beurteiler*innen
Christian Mandl ,
Andreas Henke
Klassifikation
42 Biologie > 42.13 Molekularbiologie
AC Nummer
AC05037048
Utheses ID
384
Studienkennzahl
UA | 091 | 490 | |
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