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Lectin-based virus-detecting assays
Cornelia Trinker
Art der Arbeit
Masterarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Lebenswissenschaften
Studiumsbezeichnung bzw. Universitätlehrgang (ULG)
Masterstudium Ernährungswissenschaften
Betreuer*in
Karl-Heinz Wagner
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-15482.14432.691363-3
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Influenza ist eine virale Infektion der oberen Atemwege, welche ein weltweites Gesundheitsproblem darstellt und jährlich Millionen von Menschen betrifft.
Ein gewisser Schutz gegen Influenza kann durch die Verabreichung von Antikörpern erreicht werden (im Zuge einer Impfung). Ein weiterer Ansatz um einen antiviralen Bindungspartner zu entwickeln basiert auf der Erforschung der Affinität dieser Antikörper mit Mono- und Oligosacchariden (Glykanen), der sich an der Virushülle befindlichen Glykoproteine.
Lektine, wie das prokariontische Cyanovirin-N, haben möglicherweise das Potential eine Infektion mit Grippeviren, über die Bindung des Glycans Hemagglutinin (HA) stark abzuschwächen.
Demzufolge beschäftigt sich diese Masterarbeit mit der Entwicklung einer pas-senden Oberfläche für Bindungsstudien von Lektinen an Hemaglutinin.
Aus diesem Grund, wurde eine Aufreinigung und Charakterisation von CVN als His-SUMO fusions protein ausgeführt. Der Aufreinigungsprozess wurde unter nativen Bedingungen mittels einer Ni-NTA Affinitätschromatographie durchge-führt. Die Reinheit und das Vorkommen des aufgereinigten rekombinanten CVN (rCVN) wurde mittels einer Gelelektrophorese (SDS-Page) überprüft. Desweiteren wurde ein Quicktest, angelehnt an einen Enzym-linked Immunosorbent Assay, durchgeführt um die Bindungseigenschaften des rCVNs abschätzen zu können. Anschließend sollen in dieser Masterarbeit die Entwicklung eines passenden Assaydesigns und die Oberflächenmodifikation eines Biosensor Chips für SPR Analysen erarbeitet werden.
Schließlich wurde eine mit Hemagglutinin immobilisierte Sensor-Oberfläche entworfen, um weitere Analysen mit dem rekombinanten Cyanovirin-N durchzuführen.
Die vorliegende Arbeit wurde in Zusammenarbeit zwischen der Universität Wien (Departement für Ernährungswissenschaften), der Universität für Bodenkultur und dem Austrian Institute of Technology durchgeführt.
Abstract
(Englisch)
Whenever people come into close contact with each other it is a formidable task to find suitable methods for preventing diseases such as influenza. Influenza is a viral infection of the upper respiratory tract that raises global public health threat and affects millions of people every year.
A certain protection against influenza can be achieved by the administration of antibodies throughout a vaccination. Another approach to reach antiviral binding is based on the analysis of their multi-specific affinity for the monosaccharide or oligosaccharide structures (glycans) present on viral enveloped glycoproteins.
Lectins, such as the prokaryotic Cyanovirin-N (CVN), may have the potential to inhibit Influenza A virus infections by binding glycans such as hemagglutinin (HA).
This thesis aims at developing a suitable surface for biomolecular interaction analyses between lectins and hemagglutinin.
Therefore, purification and characterisation of CVN as a his-SUMO fusion pro-tein were performed. Purification procedure itself was carried out by Ni-NTA affinity chromatography under native conditions. The purity and presence of purified recombinant CVN (rCVN) was checked by using a gel electrophoresis method (SDS-PAGE analysis). Furthermore, a quick test based on Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) designed for estimating the binding properties of rCVN was carried out. Additionally, the development of a suitable assay design and surface modification for a biosensor chip used for SPR analysis was achieved.
A sensor surface with immobilized hemagglutinin was designed, which will be ready for further binding of Cyanovirin-N. The thesis was conducted in collaboration with the University of Vienna (Department of Nutritional Sciences), the University of Natural Resources and Life Sciences of Vienna and the Austrian Institute of Technology.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
Lectin Influenza Cyanovirin-N /CVN Assay development Hemagglutinin Surface plasmon resonance
Schlagwörter
(Deutsch)
Lektin Influenza Cyanovirin-N CVN Assay Entwicklung Hemagglutinin Oberflächenplasmonenresonanz
Autor*innen
Cornelia Trinker
Haupttitel (Englisch)
Lectin-based virus-detecting assays
Paralleltitel (Deutsch)
Lektin basierende Virus erkennende Assays
Publikationsjahr
2017
Umfangsangabe
67 Seiten : Illustrationen, Diagramme
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Karl-Heinz Wagner
Klassifikation
35 Chemie > 35.71 Biochemische Methoden
AC Nummer
AC13470045
Utheses ID
40324
Studienkennzahl
UA | 066 | 838 | |