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CLEC-1 and CLEC-2
C-type lectin-like receptors encoded within the myeloid cluster of the NK gene complex
Susanne Sattler
Art der Arbeit
Dissertation
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Lebenswissenschaften
Betreuer*in
Erhard Hofer
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-30481.66196.688154-2
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
CLEC-1 und CLEC-2 gehören zu einer Familie von C-Typ lektinähnlichen Rezeptoren mit wichtigen Funktionen im natürlichen Immunsystem wie etwa als Muster-erkennungsrezeptoren auf monozytischen oder dendritischen Zellen.
Der erste Teil dieser Arbeit bestand aus einer Analyse der Expression von CLEC-2 und CLEC-1 in Blutzellfraktionen. In Monozyten und Granulozyten konnten für beide Rezeptoren niedrige bis moderate mRNA Mengen nachgewiesen werden, in Blutplättchen wurde CLEC-2 mRNA detektiert. T- und B-Lymphozyten sowie NK Zellen zeigten für beide Rezeptoren keine signifikanten Transkriptmengen. Durch Durchflusszytometrie konnte CLEC-2 Proteinexpression auf Blutplättchen und auf CD14+ monozytischen Zellen nachgewiesen werden. CLEC-2 Proteinmengen auf Monozyten zeigten klare Donorvarianz, was auf verschiedene Infektionszustände hindeuten könnte. Während Blutplättchen in Adhäsions-Assays klar an Zellen adherierten, die den CLEC-2 Liganden Podoplanin exprimierten, war die Höhe der CLEC-2 Expression auf Monozyten nicht ausreichend, um in diesem Versuch Bindung nachweisen zu können.
Im Gegensatz zu CLEC-2 konnte CLEC-1 trotz nachweisbarer mRNA- und Protein- expression nie an der Zelloberfläche detektiert werden, obwohl CLEC-1 alle Merkmale von typischen lektinähnlichen Rezeptoren aufweist. Weder proinflammatorische Stimulation noch Infektion mit Pathogenen induzierten CLEC-1 Transport an die Zelloberfläche. Da Immunofluoreszenzfärbungen und Zellfraktionierungsexperimente ein membrangebundenes, intrazelluläres Expressionsmuster ähnlich Calnexin, einem Protein aus dem Endoplasmatischen Reticulum, zeigten, könnte CLEC-1 intrazellulär lokalisiert sein und eine Funktion ähnlich den Toll-like Rezeptoren (TLR) aufweisen. Stimualtion von dendritischen Zellen mit bekannten Liganden von intrazellulären TLR führte zu einer generellen Herunterregulierung von CLEC-1 mRNA Mengen. Da diese Stimuli die Reifung von dendritischen Zellen induzieren, könnte das auf eine Rolle von CLEC-1 in unreifen dendritischen Zellen hindeuten.
Im vierten Teil dieser Arbeit, führten wir einen eingehenden Vergleich der humanen und murinen genomischen Regionen der myeloiden Familie des NK Rezeptor Komplexes durch. Dieser Vergleich zeigte eine Inversion eines Teiles der Region im Laufe der Evolution der Primatenlinie und identifizierte zwei zusätzliche in myeloiden Zellen exprimierte lektinähnliche Gene.
Abstract
(Englisch)
CLEC-1 and CLEC-2 belong to a family of C-type lectin-like receptors with important functions in the immune system, e.g. as pattern recognition receptors on monocytic and dendritic cells.
The first part of this work was devoted to evaluate the expression of CLEC-2 and CLEC-1 in subsets of peripheral blood cells. In monocytes and granulocytes low to moderate levels of mRNA for both receptors were detected, platelets contained mRNA for CLEC-2. T- and B-lymphocytes as well as NK cells did not display significant transcript levels for any of the two receptors. Using flow cytometry, CLEC-2 protein was detected on platelets and on CD14+ monocytic cells. CLEC-2 protein levels on monocytes showed a clear donor-dependent variation, which could potentially indicate different infection states. Whereas platelets readily adhered in adhesion assays to cells expressing the CLEC-2 ligand podoplanin, the level of CLEC-2 expression on monocytes apparently was not sufficient to reveal binding in this cellular assay.
In contrast to CLEC-2 and despite it contains all characteristics of typical lectin-like receptors, CLEC-1 could never be detected on the cell surface although significant mRNA and intracellular protein levels were detected. Neither pro-inflammatory stimuli nor infection with different pathogens induced its transport to the cell surface. Since immunofluorescence staining and cell fractionation experiments revealed a membrane bound intracellular pattern resembling that of the endoplasmic reticulum resident protein Calnexin, it appears that CLEC-1 may have an intracellular localization and function comparable to some of the Toll-like receptors (TLR). Following treatment of dendritic cells with known ligands of intracellular TLR, a general pattern of downregulation of CLEC-1 mRNA could be detected. As these stimuli trigger maturation of dendritic cells, this might indicate a role for CLEC-1 in immature dendritic cells.
In the fourth part of this work, we conducted an extensive comparison of the human and mouse genomic regions encoding the receptors of the myeloid subfamily of the NK receptor complexes. This revealed a large inversion of part of the region during the evolution of the primate lineage and identified two additional lectin-like genes, which we found to be also expressed in cells of the myeloid lineage.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
C-type lectin-like receptor innate immune system NK gene complex
Schlagwörter
(Deutsch)
C-Typ Lektinrezeptor natürliches Immunsystem NK Genkomplex
Autor*innen
Susanne Sattler
Haupttitel (Englisch)
CLEC-1 and CLEC-2
Hauptuntertitel (Englisch)
C-type lectin-like receptors encoded within the myeloid cluster of the NK gene complex
Paralleltitel (Deutsch)
CLEC-1 und CLEC-2
Publikationsjahr
2009
Umfangsangabe
126 S. : Ill., graph. Darst.
Sprache
Englisch
Beurteiler*innen
John Trowsdale ,
Pavel Kovarik
Klassifikation
30 Naturwissenschaften allgemein > 30.99 Naturwissenschaften allgemein: Sonstiges
AC Nummer
AC05040328
Utheses ID
4261
Studienkennzahl
UA | 091 | 441 | |