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Interaction studies of HvVPS24 within the Barley ESCRT-III complex
Neda Naghibi
Art der Arbeit
Masterarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Zentrum für Molekulare Biologie
Studiumsbezeichnung bzw. Universitätlehrgang (ULG)
Masterstudium Molekulare Biologie
Betreuer*in
Eva Stöger
DOI
10.25365/thesis.48626
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-23239.56392.470072-9
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Die Endosomal Sorting Complex Required for Transport (ESCRT)-III Maschinerie wird in Pflanzen studiert und spielt Schlüsselrollen in der Sortierung von Proteinen und der Membran Fission aber auch in der multivesikulären Kompartmentbildung.
Gerste dient als Nahrungsquelle für Menschen und Tiere. In der Wissenschaft wird dieses Getreide auch als Modellpflanze und für die Produktion von rekombinanten Proteinen verwendet.
Die Gerste ESCRT-III Mietglieder wurden identifiziert und erste Lokalisierungstudien bzw. ihre putativen Funktionen wurden in Gerste Samen studiert. Die Lokalisierung von rekombinant exprimierten ESCRT-III Proteinen (wie HvSNF7a, HvVPS24 und HvVPS60a) ist zwischen Aleurone und Subaleurone unterschiedlich und ändert sich auch während der Entwicklung.
Ziel dieser Masterarbeit war es, die Interaktionen von HvVPS24 mit ESCRT-III Komponenten wie HvSNF7, HvVPS60, HvVPS4 und dem putativen Speicherprotein HvHinb2 zu identifizieren. Die Interaktionen wurden mit dem Hefe-Zwei Hybrid System und der Bimolekularen Fluoreszenzkomplementation identifiziert. Die Bimolekulare Fluoreszenzkomplementation wurde in Blättern von Nicotiana benthamiana ausgeführt und die Interaktionen wurden mittels Konfokal Mikroskope untersucht.
Das untersuchte HvVPS24 interagiert leicht mit HvSNF7, zeigt aber keine HvVPS24 Homodimerisierung. Es wurden keine weiteren Interaktionen zwischen HvVPS24 und anderen Komponenten von HvESCRT-III beobachtet. In einer weiterführenden Arbeit sollte ein Ko-Immunopräzipitation durchgeführt werden, um Interaktionspartner von HvVPS24/HvSNF7/HvVPS60 zu entdecken.
Abstract
(Englisch)
The Endosomal Sorting Complex Required for Transport (ESCRT)-III has been studied in plants and has key roles in protein sorting, membrane fission and in multivesicular body (MBV) formation. Barley seeds, which were examined in this project, are efficient and requested platforms in molecular farming in terms of production of high quality recombinant pharmaceutical proteins. Moreover barley seeds are used as a nutrition source for human and animals. The members of ESCRT-III were identified and their localization and putative function have been characterized in barley endosperm. It has been shown that the localization of recombinant expressed ESCRT-III barley proteins such as HvSNF7a, HvVPS24 and HvVPS60a are different between aleurone and subaleurone layers of barley endosperm. It has been also reported that the localization may differ during the various developmental stages.
The aim of this study was to identify the interactions of HvVPS24 with ESCRT-III components like HvSNF7, HvVPS60, HvVPS4 and a putative seed storage protein HvHinb2. The project was designed using yeast two-hybrid (Y2H) and biomolecular fluorescence complementation (BiFC) assay to test the protein-protein interactions between these proteins. BiFC was performed in Nicotiana benthamiana leaves and analyzed by confocal microscopy.
The examined HvVPS24 does interact lightly with HvSNF7 but no HvVPS24 homodimerization was observed. According to our yeast two-hybrid and BiFC analysis there is no HvVPS24 interactions with other components of HvESCRT-III. In further studies Co-IP assays should be performed to identify the HvVPS24/HvSNF7/HvVPS60 partners in Barley endosperm.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
barley endosperm ESCRT-III HvVPS24 protein-protein interaction endomembrane system in plant
Schlagwörter
(Deutsch)
Endosperm der Gerste ESCRT-III HvVPS24 Protein-Protein Interaktionen Endomembrane System in Pflanzen
Autor*innen
Neda Naghibi
Haupttitel (Englisch)
Interaction studies of HvVPS24 within the Barley ESCRT-III complex
Paralleltitel (Deutsch)
Interaktionenstudien von HvVPS24 in ESCRT-III komplex der Gerste
Publikationsjahr
2017
Umfangsangabe
62 Seiten : Illustrationen, Diagramme
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Eva Stöger
Klassifikation
42 Biologie > 42.13 Molekularbiologie
AC Nummer
AC14469785
Utheses ID
42974
Studienkennzahl
UA | 066 | 834 | |