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Fluorescent virus-like particles as novel platform to identify immunereceptor/ligand interactions on leukocyte subsets
Calin-Petru Manta
Art der Arbeit
Diplomarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Zentrum für Molekulare Biologie
Betreuer*in
Winfried Pickl
DOI
10.25365/thesis.4925
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-30050.44251.448666-3
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Abstracts
Abstract
(Deutsch)
In dieser Arbeit haben wir uns die Frage gestellt, ob virusähnliche Partikel (VLP) mit einem fluoreszierenden Protein ausgestattet werden können, um damit Zielzellen zu identifizieren. Unsere Arbeitsgruppe hat gezeigt, dass VLP, vom Moloney Mäuse Leukämie Viruses (MoMLV), mit Immunmodulatoren oder Zytokinen ausgestattet werden können. Derartige VLP können eine immunspezifische T-Zell Antwort induzieren. Partikel, die mit fluoreszierenden Proteinen ausgestattet werden und einen Liganden für einen Rezeptor exprimieren, können verwendet werden, um Zielzellen zu detektieren. In dieser Arbeit wurde das grünfluoreszierende Protein (GFP) mit dem Matrix Protein (MA) des MoMLV verknüpft. MA::GFP wird in den “lipid rafts“ (Zellmembran) angereichert. Als Produzentenzelllinie wurden die mit dem MA::GFP stabil transfizierten HEK-293 Zellen etabliert. Die transiente Transfektion der HEK-293 MA::GFP Zellen mit Kapsidproteinen führte zur Sekretion von fluoreszierenden Partikeln, welche wir als Fluorosomen (FS) bezeichnen. FS wurden aus den Überständen der Produzentenzelllinie angereichert und mit Zielzellen inkubiert. Die behandelten Zellen wurden mittels Durchflusszytometrie analysiert. Die FS wurden mit GPI-verankerten Liganden dekoriert was in transient transfizierten HEK-293 Zellen erreicht wurde. FS die mit IL-2::GPI ausgestattet wurden, konnten erfolgreich zum Nachweis von HT-2 Zellen, von aktivierte humane T-Lymphozyten oder maligne Zellen von Patienten mit chronischer lymphatischer Leukämie. FS wurde aber auch zum Nachweis komplexer Strukturen verwendet, dabei wurde ein kompletter IL-2 Rezeptor transient transfiziert um membranständiges IL-2::GPI nachweisen zu können.
Gezeigt wurde auch, dass IL-2::GPI FS und IL-7::GPI FS, Zellen des peripheren Blutes identifizieren können. Die Schlussfolgerung ist, dass FS nützliche Hilfsmittel darstellen, die zum Nachweis von mono- oder polyvalenten immunologischen Rezeptor/Ligand Interaktion genutzt werden können.
Abstract
(Englisch)
Moloney murine leukemia virus (MoMLV) derived particles decorated with immunomodulators and cytokines can be used to influence polyclonal and antigenspecific T cell responses. By targeting fluorescent dyes to these particles, the interaction between the particle-borne ligands and their respective receptors on
the cell surface of target cells can be visualized. For that purpose, the green fluorescent protein (GFP) was fused to the matrix protein (MA) of MoMLV, which leads to lipid raft targeting and in consequence to the incorporation into virus-like particles (VLP). In a first step, HEK-293 cells stably transfected with MA::GFP were established as VLP producer cells. Upon transfection with MoMLV core proteins the production of fluorescent VLP- designated as fluorosome (FS) - was
induced. FS were purified from the supernatant of producer cells, used for staining of various target cells and analysed by flow cytometric. Decoration with specific ligands was achieved by co-transfection of GPI-anchored molecules into the producer cell. In proof of principle experiments, FS decorated with IL-2::GPI were used to stain murine HT-2 cells, which constitutively express the murine IL-2 receptor. In these experiments the staining capacity of FS was evaluated. Furthermore IL-2::GPI FS were used to stain HEK-293 cells transfected with IL-2 receptor components and vice versa. It was also shown that FS decorated with IL-2::GPI or IL-7::GPI can stain human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from healthy individuals and chronic lymphatic leukemia (CLL) patients. In conclusion FS with membranetargeted fluorescent proteins are useful tools for assessing mono- and multisubunit immune-receptor/ligand interactions.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
fluorosomen (FS) Interleukin-2 FS Interleukin-7 FS Interleukin-2 Rezeptor (alpha;beta;gamma) affinity difference HT-2 PBMC HEK-293
Schlagwörter
(Deutsch)
Fluorosomen (FS) Interleukin-2 FS Interleukin-7 FS Interleukin-2 Rezeptor (alpha;beta;gamma) Affinitsunterschiede HT-2 PBMC HEK-293
Autor*innen
Calin-Petru Manta
Haupttitel (Englisch)
Fluorescent virus-like particles as novel platform to identify immunereceptor/ligand interactions on leukocyte subsets
Paralleltitel (Deutsch)
Fluoreszierende virusähnliche Partikel als neu Plattform zur Identifikation von Immun-Rezeptor/Ligand Interaktionen auf Leukozyten Untereinheiten
Publikationsjahr
2009
Umfangsangabe
78 S. : Ill., graph. Darst.
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Winfried Pickl
Klassifikation
42 Biologie > 42.13 Molekularbiologie
AC Nummer
AC08157344
Utheses ID
4392
Studienkennzahl
UA | 441 | | |