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Influence of EAPP on the DNA damage response of human osteosarcoma cells

Christoph Penz

Art der Arbeit

Diplomarbeit

Universität

Universität Wien

Fakultät

Fakultät für Lebenswissenschaften

Studiumsbezeichnung bzw. Universitätlehrgang (ULG)

Diplomstudium Pharmazie

Betreuer*in

Hans Rotheneder

Mitbetreuer*in

Manfred Ogris

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DOI

10.25365/thesis.50712

URN

urn:nbn:at:at-ubw:1-30903.16159.719265-2

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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)

Abstracts

Abstract

(Deutsch)

Zellzyklusstörungen werden oft mit der Entstehung von Krebs in Verbindung gebracht. Die Aktivität von Transkriptionsfaktoren der E2F Familie spielt eine wichtige Rolle im Verlauf des Zellzyklus. E2F verstärkt die Genexpression von Proteinen, die für die Regulation des Zellzyklus unverzichtbar sind. Das kürzlich identifizierte E2F-assozierte Phospho-Protein (EAPP) interagiert mit den Transkriptionsfaktoren E2F-1 bis E2F-3. Höhere EAPP Expression spielt vermutlich eine wichtige Rolle bei bösartigen Transformationen von Zellen, indem EAPP die Zellen vor der E2F-induzierten Apoptose schützt. In U2OS Zellen führte ein RNAi unterstützter Knockdown von EAPP zum Zelltod. In normalen Zellen ist EAPP nur in einer geringen Konzentration notwendig, aber die Konzentration ist vom Zustand der Zelle abhängig. DNA Schäden führen zu einem Anstieg von EAPP, welches die Expression von p21 induziert. Durch das Anhalten des Zellzyklus in G1, können Zellen vor Apoptose bewahrt werden. EAPP reguliert auch die Regulation des Tumorsuppressors p14ARF, wodurch Zellen vom p14ARF regulierenden Zelltod geschützt sind. Dies zeigt, dass EAPP auch für bösartige Veränderungen in Zellen wichtig ist. Das p-Glycoprotein ist einer der wichtigsten Regulatoren der Multi-Drug- Resistence (MDR). EAPP kann auch die Wirksamkeit von Chemotherapeutika reduzieren, indem es den MDR-1 Promotor des p-Glycoproteins induziert. In dieser Diplomarbeit wurden spezifische Bindungsfragmente von EAPP untersucht, die für mögliche Interaktionen mit wichtigen Proteinen des Zellzyklus wichtig sind. Dafür wurden U2OS Zellen mit Expressionsvektoren für diese spezifische Fragmente von EAPP transfekiert. Doppelstrangbrüche wurden durch Etoposid verursacht, um die Rolle von EAPP während eines DNA Schadens zu untersuchen. Der Einfluss von endogenem EAPP und der unterschiedlichen gekürzten Versionen von EAPP auf die Aktivität von p-Akt S473, p21, p53 und Bax wurden untersucht. Während p53 und p21 ein ähnliches Expressionsmuster wie EAPP gezeigt haben, veränderten sich die Proteinmengen bei BAX kaum. Andererseits, wird p-Akt S473 mit der Etoposid- Behandlung weniger, wenn EAPP steigt. Das könnte auf eine umgekehrte Beziehung der beiden Proteinen deuten. Die Effekte von p-Akt S473 variieren auch zwischen den einzelnen Zelllinien, die unterschiedliche Versionen von EAPP enthalten.

Abstract

(Englisch)

Disruptions of the cell cycle regulation are often associated with cancerogenesis. The activity of E2F transcription factors plays an essential part of integrating cell cycle progression with transcription. E2F enhances the expression of genes which are indispensable for the regulation of cell cycle. The previously identified E2F-associated phospho- protein (EAPP) interacts with the E2F transcription factors, E2F-1 to E2F-3. It is supposed that high levels of EAPP play an important part in malignant transformations of cells by preventing cells from E2F-1 induced apoptosis. A RNAi- mediated knock down of EAPP results in cell death in U2OS cells. EAPP is only required in low concentrations, but the concentration depends on cell conditions. Upon DNA damage, it increases and enhances the expression of p21, independently of p53, resulting in protecting cells from apoptosis via G1 arrest. EAPP can also negatively regulate the expression of the tumorsupressor p14ARF. This can prevent cells from p14ARF regulated apoptosis and shows that EAPP might also be important for malignant transformations. Moreover, EAPP can reduce the efficacy of chemotherapeutics by inducing the MDR-1 promotor of p- glycoprotein, one of the most common regulator of multi drug resistance. In this diploma thesis, U2OS cells were transfected with expression vectors for different truncations of EAPP to investigate specific binding fragments of EAPP that are essential for interactions with cell cycle related proteins. Double strand breaks were caused by treating cells with etoposide to investigate the role of EAPP during DNA damage. The influence of the endogenous and the different truncated versions of EAPP on the levels and activity of p-Akt S473, p21, p53 and Bax were examined. While p53 and p21 levels show similiar expression profiles like EAPP, Bax levels do not change at all. On the contrary, p-Akt S473 decreases during prolonged etoposide treatment when EAPP rises. This indicates an inverse relationship of these proteins. The effects on p-Akt S473 also variegate between the cell lines with different versions of EAPP.

Autor*innen

Christoph Penz

Haupttitel (Englisch)

Influence of EAPP on the DNA damage response of human osteosarcoma cells

Paralleltitel (Deutsch)

Einfluss von EAPP auf die DNA Schäden induzierte Antwort der menschlichen Osteosarkomazellen

Publikationsjahr

2017

Umfangsangabe

65 Seiten : Diagramme

Sprache

Englisch

Beurteiler*in

Hans Rotheneder

Klassifikationen

30 Naturwissenschaften allgemein > 30.00 Naturwissenschaften allgemein: Allgemeines ,

42 Biologie > 42.13 Molekularbiologie

AC Nummer

AC14546032

Utheses ID

44824

Studienkennzahl

UA | 449 | | |

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Schlagwörter