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Untersuchung von Roburin B und Vescalagin mittels UND Osteoblasten-Osteoklasten Resorptionsmodell und Proliferationsassay
Daniel Danninger
Art der Arbeit
Diplomarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Lebenswissenschaften
Betreuer*in
Oskar Hoffmann
DOI
10.25365/thesis.5183
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-29623.64348.610160-9
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Abstracts
Abstract
(Deutsch)
In dieser Arbeit wurden die Substanzen Roburin B und Vescalagin hinsichtlich ihrer Wirkung auf die Resorptionsfähigkeit bzw. Differenzierung von Osteoklasten getestet. Verwendet wurde einerseits ein Osteoblasten-Osteoklasten Resorptionsmodell (Pitassay) und andererseits Signaltransduktionsstudien zur Untersuchung bestimmter Proteinkinasen.
Gesääte Osteoblasten wurden mit Vitamin D3 und PGE2 versetzt. In weiterer Folge bildeten die OB RANKL, welcher die Differenzierung von Knochenmarkszellen in Osteoklasten einleitete. Nach drei Tagen erfolgte die Zugabe von Roburin B in unterschiedlichen Konzentrationen für 48 Stunden. Aus den Ergebnissen konnte man ableiten dass die Konzentrationen 5x10-5, 1x10-5 und 5x10-6 die Resorptionsfähigkeit von Osteoklasten signifikant senken können.
Für die Signaltransduktionsstudien wurden mithilfe von RANKL Osteoklasten aus RAW 264.7 Zellen erzeugt. Durch Zelllyse, Gelelektrophorese und Western Tranfer wurden intrazelluläre Proteine auf eine Nitrozellulosemembran übertragen und mittels Chemiluminiszenz sichtbar gemacht. Phospho P42/P44 MAPK wurde von Roburin B nach 15 min bis 2 Stunden leicht inhibiert, was eine Hemmung der Proliferationsphase bedeutet. Weiters kam es zu vermehrter Aktivität von phospho NFkB welche die Osteoklastendifferenzierung kurzzeitig anregt und eine transiente Signalverstärkung bei phospho P38 MAPK in der Applikationsdauer 1-5 min was einen Einfluss auf die Überlebensfähigkeit bzw. Zelldifferenzierung vermuten lässt.
Vescalagin lieferte bei phospho AKT eine Signalverstärkung nach einer Minute, 60 und 120 Minuten und erhöhte somit die Zellproliferationsphase. P38 MAPK wurde nach 15 Minuten und 60 Minuten abgeschwächt. Intensivere Banden waren auch im Phospho P42/P44 MAPK nach 120 Minuten und im phospho NFkB zu sehen. Das Signal von phospho Src war transient und wurde nach 15 leicht intensiver.
Dieses Signal spielt eine wichtige Rolle bei der Zelladhäsion der Osteoklasten an der Knochenoberfläche.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Deutsch)
RAW264.7 Osteoklasten /Differenzierung Resorption Proliferation Antikörper Gelelektrophorese Pitassay Proteinassay Western Transfer
Autor*innen
Daniel Danninger
Haupttitel (Deutsch)
Untersuchung von Roburin B und Vescalagin mittels UND Osteoblasten-Osteoklasten Resorptionsmodell und Proliferationsassay
Publikationsjahr
2009
Umfangsangabe
118 S.
Sprache
Deutsch
Beurteiler*in
Oskar Hoffmann
Klassifikation
44 Medizin > 44.38 Pharmakologie
AC Nummer
AC07697027
Utheses ID
4633
Studienkennzahl
UA | 449 | | |