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Identification and quantification of peptides via HPLC and MS

Sarala Pellikan

Art der Arbeit

Diplomarbeit

Universität

Universität Wien

Fakultät

Fakultät für Lebenswissenschaften

Studiumsbezeichnung bzw. Universitätlehrgang (ULG)

Diplomstudium Pharmazie

Betreuer*in

Ernst Urban

Mitbetreuer*in

Judith Wackerlig

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DOI

10.25365/thesis.52774

URN

urn:nbn:at:at-ubw:1-18490.78212.862771-5

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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)

Abstracts

Abstract

(Deutsch)

In dieser Studie zeigen wir, dass Aminosäuren unter verschiedenen pH-Bedingungen aufgetrennt werden können und führen sie als Vorstudie für Rinderserumalbumin durch. Im praktischen Teil wurden Aminosäuren getrennt, fraktioniert sowie als externe und interne Standards verwendet. Diese Studien waren wichtig für die endgültige Trennung und Vorfraktionierung der Probe P02769. Weitere Experimente wurden mit BSA und Aminosäuren in Kombination durchgeführt. In diesem Fall konnten wir die Menge an Tryptophan in BSA nachweisen. Basierend auf der HPLC-Fraktionierung und der Standardadditionsmethode vergleichen wir die Ergebnisse, um festzustellen, welche Methode den Verlust der Probe minimiert. Bei BSA wurde die Nachweisgrenze (untere LOD = 0,002 µg/µL, obere LOD = 2,727 µg/µL) gemessen. Weiterhin wurde die Grenze der Quantifizierung (LOQ = 0,559 µg/µL) berechnet. BSA wurde in einer Vorstudie für die Probe P02769 verwendet. Da wir in der Lage waren, HPLC-Läufe bei einem pH-Wert von 10 bei BSA durchzuführen, fanden wir heraus, dass die Methode geeignet ist, Gehirnproben zu messen. Die Proteinmischung P02769 wurde schließlich durch HPLC bei einem pH-Wert von 10 vorfraktioniert und mit LC-MS bei einem pH-Wert von 3 gemessen. Die Vorfraktionierung ist ein sehr wichtiges Instrument, da die Komplexität der Proteine reduziert werden kann und somit mehr Proteingruppen identifiziert werden können. [Smidak et al., 2016]

Abstract

(Englisch)

In this study we demonstrate that amino acids can be separated under various pH conditions, performing it as preliminary studies for bovine serum albumin. In the practical part, amino acids were separated, fractionated as well as used as external and internal standards. These studies were important for the final separation and pre-fractionation of the sample P02769. Further experiments were performed with BSA and amino acids in combination. In this case we could reveal the amount of Tryptophan in BSA. Based on HPLC fractionation and the standard addition method, we compare the results to determine which method minimizes the loss of the sample. In case of BSA the limit of detection (lower LOD = 0.002 µg/µL, upper LOD = 2.727 µg/µL) was measured. Furthermore, the limit of quantification (LOQ =0.559 µg/µL) was calculated. BSA was used in a preliminary study for the sample P02769. Since we were able to perform HPLC runs in a pH of 10 on BSA, we found that the method is suitable to measure brain samples. The protein mixture, P02769, was finally pre-fractionated by HPLC at a pH of 10 and measured with LC-MS at a pH of 3. Pre-fractionation is a very important tool as the protein complexity can be reduced and thus more protein groups can be identified. [Smidak et al., 2016]

Autor*innen

Sarala Pellikan

Haupttitel (Englisch)

Identification and quantification of peptides via HPLC and MS

Paralleltitel (Deutsch)

Identifikation und Quantifikation von Peptiden via HPLC und MS

Publikationsjahr

2018

Umfangsangabe

98 Seiten : Illustrationen, Diagramme

Sprache

Englisch

Beurteiler*in

Ernst Urban

Klassifikationen

44 Medizin > 44.40 Pharmazie, Pharmazeutika ,

44 Medizin > 44.42 Pharmazeutische Chemie

AC Nummer

AC15084616

Utheses ID

46618

Studienkennzahl

UA | 449 | | |

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Schlagwörter