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Bioluminescent and fluorescent reporter constructs for tracking signalling pathways in vitro and tumour growth in vivo
Julia Maier
Art der Arbeit
Dissertation
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Lebenswissenschaften
Studiumsbezeichnung bzw. Universitätlehrgang (ULG)
Doctor of Philosophy-Doktoratsstudium NAWI Bereich Lebenswissenschaften (Dissertationsgebiet: Biologie)
Betreuer*in
Manfred Ogris
DOI
10.25365/thesis.57430
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-26130.55982.990354-1
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Reportersysteme sind mittlerweile ein fundamentaler Bestandteil der molekularbiologischen Forschung. In solchen Systemen wird ein Promotor, der auf einen biologischen Prozess reagiert, mit einem Output Gen gekoppelt, dessen Expression leicht zu detektieren ist. Seit der Entdeckung der Firefly Luciferase und des Green Fluorescent Protein werden fluoreszente Proteine sowie Luciferasen sehr häufig in Reportersystemen verwendet. Oft werden solche Systeme eingesetzt, um die Aktivität von Signalwegen zu untersuchen. Ebenso können bestimmte Konstrukte auch zur Analyse von Prozessen in vivo mittels bildgebender Verfahren verwendet werden.
In dieser Arbeit wurden Reporterkonstrukte generiert, um die Aktivität der drei entwicklungsbiologisch zentralen Signalwege Wnt, Hedgehog und Notch zu visualisieren. Hierfür wurden für jeden Signalweg fluoreszierende sowie lumineszierende Reporterkonstrukte erstellt. Die daraus entstehenden Reporter für einzelne Signalwege wurden dann mit bereits in der Literatur beschriebenen Konstrukten verglichen. Nach erfolgreicher Evaluierung wurden Multi-Signalweg-Reporter kloniert und evaluiert, welche alle drei Signalwege auf einmal detektieren können, und zwar jeweils einen aus fluoreszierenden Proteinen und einen aus Luciferase-Reportern. In einem weiteren Projekt wurde Fluoreszenz- und Biolumineszenzimaging eingesetzt, um das in vivo Wachstum und die Transfektion von fluoreszenzmarkierten Brustkrebszell-Metastasen in der Lunge zu visualisieren. Letztendlich wurde eine Methode, mit der einfach und reproduzierbar Polyplexe für nicht-virale Transfektion in vitro und in vivo hergestellt werden können, evaluiert.
Das breite Spektrum der gesamt verwendeten Reportersysteme erlaubt eine detailreiche Diskussion, wie etwa einen Vergleich von fluoreszierenden Proteinen und Luciferasen, sowie die Eignung der benutzten Promotoren in Bezug auf Spezifität und Empfindlichkeit. Zuletzt wird diskutiert, wie die generierten Reporterkonstrukte in nachfolgenden Projekten optimiert werden können, und ein Ausblick auf die Nutzung solcher Konstrukte zur Identifizierung und Evaluierung neuer therapeutischer Wirkstoffe gegeben.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Deutsch)
Biolumineszenz Fluoreszenz Reporterkonstrukte Signalwege Wnt Notch Hedgehog Klonierung in vitro in vivo
Autor*innen
Julia Maier
Haupttitel (Englisch)
Bioluminescent and fluorescent reporter constructs for tracking signalling pathways in vitro and tumour growth in vivo
Publikationsjahr
2019
Umfangsangabe
i, 117 Seiten : Illustrationen, Diagramme
Sprache
Englisch
Beurteiler*innen
Fritz Aberger ,
Jan Frew
Klassifikation
42 Biologie > 42.13 Molekularbiologie
AC Nummer
AC15402933
Utheses ID
50707
Studienkennzahl
UA | 794 | 685 | 437 |