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Regulation of nuclear Akt kinase activity in cells
Michael Moawad
Art der Arbeit
Masterarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Zentrum für Molekulare Biologie
Studiumsbezeichnung bzw. Universitätlehrgang (ULG)
Masterstudium Pharmazie
Betreuer*in
Ivan Yudushkin
Alle Rechte vorbehalten / All rights reserved
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-13094.22235.486269-9
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)

Abstracts

Abstract
(Deutsch)
Nachfolgend wird die Regulation der Kinase von Nuclear Akt innerhalb der Zelle untersucht und ob die Phosphorylierung von T308 in Nuclear Akt für seine Aktivität wichtig ist oder nicht. Die T308-Phosphorylierung ist ein Indikator für die Akt-Aktivität. Wir verwendeten Akt-Konstrukte, die im Zellkern und in der gesamten Zelle lokalisiert sind. Mithilfe der Western-Blotting-Technik konnten wir das Phosphorylierungssignal des T308 im nuklearen und cytosolischen Akt nachweisen. Unsere Ergebnisse zeigen, dass T308 im nuklearen Akt phosphoryliert ist, was seine Aktivität anzeigt. Wir diskutierten und arbeiteten an der Phosphorylierung von S473 und zeigten seine Rolle bei der Akt-Phosphorylierung im Zellkern und im Cytosol. Wir haben versucht, dieses Ziel mit einer Nuclear-Akt-Mutante auf S473 zu erreichen. Gemäß den Bändern aus dem Western-Blotting haben wir gezeigt, dass S473 für die Akt-Aktivität im Zellkern wichtig ist, aber nicht für die cytosolische Akt-Aktivität. Wir haben auch die jüngsten Daten zu Torin1 bestätigt, die einen signifikanten Effekt auf die Hemmung der Phosphorylierung von T308 im Cytosol haben. Jedoch haben wir festgestellt, dass in dem Kern kein signifikanter Effekt auftritt, was darauf hindeutet, dass es eine andere Kinase gibt, die zur T308-Phosphorylierung im Inneren des Kerns beiträgt. Obwohl kürzlich berichtet wurde, dass NU-7441 ein hochselektiver DNA-PK-Inhibitor ist, hatte es in unseren Experimenten keine signifikante Wirkung innerhalb des Kerns. Wir können aber darauf hinweisen, dass DNA-PK in HeLa-Zellen, an denen wir gearbeitet haben, keinen Beitrag zur Phosphorylierung von Akt im Kern leistet.
Abstract
(Englisch)
This examines the regulation of nuclear Akt kinase inside the cell and if the phosphorylation of T308 in nuclear Akt is important for its activity or not. T308 phosphorylation is an indicator for Akt activity. We used Akt constructs localized in the nucleus and one another in the whole cell. Using Western blotting technique helped us to detect the phosphorylation signal of the T308 in nuclear and cytosolic Akt. Our results demonstrate that T308 is phosphorylated in nuclear Akt which indicate its activity. We discussed and worked on the phosphorylation of S473 and showed its role in Akt phosphorylation in the nucleus and in the cytosol. We tried to reach this goal using a nuclear Akt mutant on S473 and according to the bands from western blotting, we demonstrate that S473 is important for Akt activity in the nucleus but it's not important for cytosolic Akt activity. We also confirmed the recent data about Torin1 which has a significant effect on inhibition of the phosphorylation of T308 in the cytosol, but we found that in the nucleus has a non-significant effect, suggesting that there's another kinase which contributes to the T308 phosphorylation inside the nucleus. Despite NU-7441 is recently reported as a highly and selective DNA-PK inhibitor, in our experiments it has a non-significant effect inside the nucleus but we can suggest that DNA-PK in HeLa cells, which we worked on, does not contribute to phosphorylation of Akt inside the nucleus.

Schlagwörter

Schlagwörter
(Englisch)
Serine/threonine protein kinase B PKB Akt growth factor receptor tyrosine kinases PH domain physiological activity regulation mammalian target of rapamycin complexes mTORCs GSK3ß TSC2 NU-7441 Torin
Schlagwörter
(Deutsch)
Serin Threonin-Proteinkinase B PKB Akt Wachstumsfaktorrezeptor Tyrosinkinasen PH-Domäne Regulierung der physiologischen Aktivität Säugerziel von Rapamycin-Komplexen mTORCs GSK3ß TSC2 NU-7441 Torin
Autor*innen
Michael Moawad
Haupttitel (Englisch)
Regulation of nuclear Akt kinase activity in cells
Paralleltitel (Deutsch)
Regulation der Akt-Kinase-Aktivität in Zellen
Publikationsjahr
2019
Umfangsangabe
30 Seiten : Illustrationen
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Ivan Yudushkin
Klassifikation
42 Biologie > 42.13 Molekularbiologie
AC Nummer
AC15468993
Utheses ID
51411
Studienkennzahl
UA | 066 | 605 | |
Universität Wien, Universitätsbibliothek, 1010 Wien, Universitätsring 1