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Is Polyomavirus Middle Tumor Antigen induced cell transformation dependent on a PP2A chaperone?
Michaela Martina Zrelski
Art der Arbeit
Masterarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Zentrum für Molekulare Biologie
Studiumsbezeichnung bzw. Universitätlehrgang (ULG)
Masterstudium Molekulare Mikrobiologie, Mikrobielle Ökologie und Immunbiologie
Betreuer*in
Egon Ogris
DOI
10.25365/thesis.58947
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-15559.13849.783889-7
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Das Middle T Antigen (PyMT) des murinen Polyomaviruses induziert Zelltransformation und verschiedene Tumore in neugeborenen Mäusen. Die Assoziation der katalytischen C und strukturellen A Untereinheit der Protein Phosphatase 2A (PP2A) mit PyMT ist die Grundlage für das Entstehen des sogenannten Transformationskomplexes und ist demnach notwendig für die zelluläre transformation. Interessanterweise kann auch katalytisch inaktive C Untereinheit mit PyMT assoziieren und den Transformationskomplex aufbauen. Ziel dieser Arbeit war es, die Auswirkungen des Protein Phosphatase 2A Aktivator Proteins (PTPA), ein Protein welches für die PP2A Biogenese benötigt wird, auf die von PyMT induzierte Transformation zu untersuchen. Zu diesem Zweck haben wir PTPA in zwei verschiedenen murinen embryonischen Fibroblastenzelllinien (MEF) mittels des Cre-Lox Systems deletiert. Des Weiteren konnten wir, durch die Anwendung eines kombinatorischen CRISPR/Cas9 Ansatzes, stabile Ptpa knock-out Klone in einer bereits etablierten PyMT exprimierenden Zelllinie herstellen. Wir haben in beiden zellulären Systemen den Phänotyp der Ptpa Deletion rekapituliert und die Resultate durch Reexpression von ektopischem, mit myc markiertem PTPA (myc-PTPA) validiert. Dabei konnten wir zeigen, dass der bereits etablierte Phänotyp der Ptpa Deletion reproduzierbar ist. Mittels Fokus Formation Analysen demonstrierten wir, dass in MEFs das onkogene Potential von PyMT beeinträchtigt ist, jedoch durch myc-PTPA Expression wiederhergestellt werden kann. Die Formation des Transformationskomplexes und demnach auch die Assoziation von PP2A A und C Untereinheiten, sowie der src Kinase, war erhöht und nicht beeinträchtigt in der Abwesenheit von PTPA. Im Gegensatz dazu, beobachteten wir jedoch eine Reduktion und nicht etwa einen Anstieg der Tyrosinphosphorylierung an PyMT in den knock-out Zellen. Im Folgenden, stellen sich hier die Fragen wie die Transformationsfähigkeit von PyMT beeinträchtigt und ob im Zuge dessen die Aktivität von PP2A und src beeinflusst wird. Weitere Untersuchungen, auch von weiteren Proteinen des Transformationskomplexes, die nicht Gegenstand dieser Arbeit waren, sind von Größtem Interesse und könnten helfen zukünftig die zugrundeliegenden Mechanismen der zellulären Transformation und der Regulation von PP2A durch PTPA aufzuklären.
Abstract
(Englisch)
The murine polyomavirus middle T antigen (PyMT) leads to cell transformation and induces a variety of tumors in new-born mice. Association of the catalytic C and structural A subunit of protein phosphatase 2A (PP2A) with PyMT leads to the assembly of the so-called transformation complex and is necessary for transformation. However, it has been shown that catalytically inactive C subunit can associate and build up the transformation complex. In this study, we wanted to investigate whether PTPA, protein phosphatase 2A activator, a protein known to be required for PP2A biogenesis, is involved in PyMT induced transformation. For this purpose we deleted PTPA in two different mouse embryonic fibroblast (MEF) lines using the Cre-Lox system. Additionally, we established stable Ptpa knock-out clones of a well-defined PyMT-expressing cell line using a combinatorial CRISPR/Cas9 approach. We investigated the phenotype in both cellular backgrounds and validated the results by re-expression of ectopic myc-tagged PTPA. We could show that the established phenotype of Ptpa knock-out could be reproduced. Analysis of the focus formation ability in MEFs lacking PTPA showed that the oncogenic potential of PyMT was impaired and could be rescued by myc-PTPA expression. Through PyMT immunoprecipitation experiments we found that the formation of the transformation complex, such as the association of PP2A A and C subunit as well as src kinase, was increased and not impaired. However, PyMT tyrosine phosphorylation was reduced rather than increased compared to the parental cells. These findings raise the questions how the transformation ability is impaired and whether PP2A and src activity are affected. Investigation of other proteins of the transformation complex, which were not included in this study, might be of future interest to further resolve the underlying mechanisms of cellular transformation and PTPA mediated regulation of PP2A.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
PP2A Polyomavirus Middle Tumor Antigen Protein Phosphatase 2a Aktivator Protein (PTPA)
Schlagwörter
(Deutsch)
PP2A Polyomavirus Middle Tumor Antigen Protein Phosphatase 2a Aktivator Protein (PTPA)
Autor*innen
Michaela Martina Zrelski
Haupttitel (Englisch)
Is Polyomavirus Middle Tumor Antigen induced cell transformation dependent on a PP2A chaperone?
Paralleltitel (Deutsch)
Ist die vom Polyomavirus Middle Tumor Antigen ausgelöste zelluläre Transformation abhängig von einem PP2A Chaperon?
Publikationsjahr
2019
Umfangsangabe
123 Seiten : Diagramme
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Egon Ogris
AC Nummer
AC15484645
Utheses ID
52046
Studienkennzahl
UA | 066 | 830 | |