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Metabolization of CE-123 in in vitro 2D hepatic cell culture models
Verena Carina Johler
Art der Arbeit
Diplomarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Lebenswissenschaften
Studiumsbezeichnung bzw. Universitätlehrgang (ULG)
Diplomstudium Pharmazie
Betreuer*in
Thierry Langer
DOI
10.25365/thesis.63517
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-18867.77006.813561-4
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
CE-123 ist eine neu synthetisierte Verbindung, die von dem Narkolepsie Medikament Modafinil abgeleitet wurde. Modafinil ist pharmakologisch als ein atypischer Dopamin-Wiederaufnahmehemmer charakterisiert, der vermutlich durch die Hemmung von DAT wirkt. Modafinil hat jedoch zahlreiche unerwünschte Wirkungen, die seine Anwendung einschränken. CE-123 wurde als selektiverer Alternativwirkstoff entwickelt, mit dem Ziel, die Nebenwirkungen zu reduzieren. CE-123 wurde in einer in-vitro-Metabolismus Studie untersucht, die mit zwei hepatischen Zelllinien, nämlich HepG2 und HepaRG, durchgeführt wurde. Der Hauptzweck der Verwendung der HepG2-Zelllinie war die Etablierung eines Assays, der geeignet ist, mögliche Metaboliten von CE-123 zu bilden und nachzuweisen. Es ist jedoch bekannt, dass HepG2 Zellen nur begrenzte Phase I Kapazitäten hat. HepaRG Zellen wurden eingesetzt, um die metabolische Kapazität des Assays zu verbessern, da HepaRG-Zellen im Vergleich zu HepG2 eine signifikant höhere metabolische Kapazität der Phase I Enzyme haben. Da Modafinil ein etabliertes Medikament ist, wurde es eingesetzt, um die Funktionalität und die Anwendbarkeit des Assays zu beurteilen. Um einen funktionellen Assay zu etablieren, wurden Variationen des Experiments mit HepG2-Zellen durchgeführt, einschließlich des Verzichts auf Antibiotika, um Störungen der metabolischen Aktivität auszuschließen. Das entwickelte Protokoll wurde dann für den Versuch mit HepaRG Zellen verwendet. Für die Vorhersage von Metaboliten und zur Unterstützung der Metabolitenidentifikation wurde die Software Meteor™ nexus eingesetzt. Die Proben wurden mittels LC-MS gemessen, wobei die interne Standardmethode zur Quantifizierung verwendet wurde. Sowohl bei HepG2 als auch bei HepaRG wurde eine Abnahme der Konzentration beider Verbindungen beobachtet, dennoch war es nicht möglich, Metaboliten in den mit HepG2-Zellen durchgeführten Experimenten zu finden. Die HepaRG-Zellen zeigten jedoch die Fähigkeit, zumindest einen Metaboliten zu bilden, der der Vorhersage entspricht, die über die Meteor™ nexus-Software durchgeführt wurde.
Abstract
(Englisch)
CE-123 is a newly synthesized compound that was derived from the narcolepsy medication modafinil. Modafinil is pharmacologically characterized as an atypical dopamine reuptake inhibitor that is suspected to act through the inhibition of the dopamine transporter DAT. Modafinil has numerous adverse effects, which limit its application. CE-123 was developed as a more selective alternative with the goal to reduce adverse effects. CE-123 was probed in an in vitro metabolism study that was conducted with two hepatic cell lines, namely HepG2 and HepaRG. The main purpose of the utilization of the HepG2 cell line was to establish an assay suited to form and subsequently detect possible metabolites of CE-123. HepG2 however are known to have a limited metabolic capacity in respect of Phase I metabolization enzymes. Therefore, HepaRG were procured to ameliorate the metabolic output, as HepaRG cells have significantly higher Phase I metabolic capacities, compared to HepG2. As modafinil is an established drug it was employed to help assess the functionality of the assay, as well as the applicability of the experiments. In order to establish a functional assay, variations of the experiment were conducted with HepG2 cells, including the omission of antibiotics, to rule out metabolic nuisances. The established protocol was then used for the experiment with HepaRG. For the prediction of metabolites and support of metabolite identification the Meteor™ nexus software was utilized. The samples were measured via LC-MS, utilizing the internal standard method for quantification. A decrease in concentration of both compounds was observed with HepG2 as well as HepaRG, it was however not possible to distinguish metabolites in the experiments conducted with HepG2 cells. The HepaRG cells however presented the capacity to form at least one metabolite corresponding to the prediction conducted via the Meteor™ nexus software.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
CE-123
Schlagwörter
(Deutsch)
CE-123
Autor*innen
Verena Carina Johler
Haupttitel (Englisch)
Metabolization of CE-123 in in vitro 2D hepatic cell culture models
Paralleltitel (Deutsch)
Metabolisierung von CE-123 in in vitro 2D-Leberzellkulturmodellen
Publikationsjahr
2020
Umfangsangabe
iv, iii, 79 Seiten : Illustrationen, Diagramme
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Thierry Langer
AC Nummer
AC16146209
Utheses ID
56344
Studienkennzahl
UA | 449 | | |