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In vitro technology of medicinal Cannabis
Lisa Kronberger
Art der Arbeit
Diplomarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Lebenswissenschaften
Studiumsbezeichnung bzw. Universitätlehrgang (ULG)
Diplomstudium Pharmazie
Betreuer*in
Sergey Zotchev
Mitbetreuer*in
Andrea Kodym
DOI
10.25365/thesis.64308
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-29368.28627.222674-9
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Für die Entwicklung eines verlässlichen Protokolls für die indirekte in vitro Regeneration von Cannabis sativa L., wurden die Auswirkungen von verschiedenen Konzentrationen und Kombinationen von acht Pflanzenwuchsstoffen, verschiedene Kohlenstoffquellen (Saccharose, Maltose), verschiedene Basalmedien (MS voll, MS halb, zwei-Komponenten Cannabis Dünger), Aktivkohle und der Einfluss von hellen oder dunklen Kulturbedingungen bezüglich Kalluswachstum mit fünf verschiedenen Chemotypen getestet. Es konnte mit allen Chemotypen erfolgreich (100 %) Kallus von Blättern und den weiblichen Samenanlagen mit zwei Wuchsstoffen auf einem Kulturmedium mit Cannabis Dünger in hellen Bedingungen initiiert werden. Für die Regeneration in Pflanzen wurden 29 bereits publizierte und 9 selbsterstellte Medien getestet. Jedoch zeigte kein Kallus Zeichen von einer Regeneration in Pflanzen. Da bekannt ist, dass in Kalluskulturen häufig somaklonale Variation vorkommt, und sich diese in Form von Regenerationsproblemen aufgrund ungesunder Kulturen zeigt, wurde der Ploidie-Status der Zellkerne via Durchflusszyto-metrie untersucht. Die Ergebnisse zeigten, dass mindestens 73 % der analysierten Zell-kerne endopolyploid waren. Um die Daten weiter zu evaluieren, wurde der Endopolyploidie Index (EI) berechnet. Es konnte durch die hohen EI-Werte der sogar jungen Kalluskulturen gezeigt werden, dass das Alter der Cannabis Kalluskulturen eine eher geringe Rolle für somaklonale Variation spielt. Maltose als Kohlenstoffquelle schien den größten Einfluss auf den Ploidie Status von Cannabis Kalluskulturen zu haben, da alle, bis auf einen analysierten Maltose-Medium abstammenden Kallus, Endopolyploidie zeigten. Maltose in Kombination zwei Wuchsstoffen hatte das größte Auftreten von Endopolyploidie.
Abstract
(Englisch)
For the development of a reliable indirect in vitro plant regeneration protocol for Cannabis sativa L., the effects of different concentrations and combinations of eight different plant growth regulators, different carbon sources (maltose, sucrose), different basal media (full MS, half MS, two component cannabis fertilizer), activated charcoal and the influence of light/dark culture environment on callus growth were investigated in five chemotypes. Callus was successfully induced (100 %) from ovule and leaf explants of all chemotypes with two growth regulators in light conditions on a cannabis fertilizer-containing culture medium. For plant regeneration, 29 already published and 9 self-designed media were tested. However, no callus showed signs of regeneration into plan-tlets. Since somaclonal variation is known to occur in callus cultures and can be mani-fested in regeneration problems due to the loss of culture health, the ploidy level of callus cells nuclei was assessed via flow cytometry analysis. The results showed at least 73 % of analyzed calli being endopolyploid. For a further evaluation of the data, the endopolyploidy index (EI) was assessed. The resulting high EI-values of even young callus cultures showed the rather low influence of the age on somaclonal variation in cannabis callus cultures. Maltose as carbon source seemed to have the greatest influence on the ploidy level of cannabis callus cultures, since all, except for one analyzed maltose media derived callus, showed endopolyploidy. Maltose in combination with two growth regulators had the highest occurrence of endopolyploidy.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
In vitro cultivation Cannabis Callus Plant regeneration Flow cytometry
Schlagwörter
(Deutsch)
In vitro Kultivierung Cannabis Kallus Pflanzenregeneration Durchflusszytometrie
Autor*innen
Lisa Kronberger
Haupttitel (Englisch)
In vitro technology of medicinal Cannabis
Paralleltitel (Deutsch)
In vitro Technologie von medizinischem Cannabis
Publikationsjahr
2020
Umfangsangabe
88 Seiten : Illustrationen, Diagramme
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Sergey Zotchev
AC Nummer
AC16174594
Utheses ID
57058
Studienkennzahl
UA | 449 | | |