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Development of a real-time PCR assay for potentially allergenic soy and its validation as part of a multiplex assay for soy, celery and white mustard
Leonie Lester
Art der Arbeit
Masterarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Chemie
Studiumsbezeichnung bzw. Universitätlehrgang (ULG)
Masterstudium Lebensmittelchemie
Betreuer*in
Margit Cichna-Markl
DOI
10.25365/thesis.70754
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-11255.39102.228254-7
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Die Anzahl der Fälle von Lebensmittelallergien hat in den letzten Jahrzehnten zugenommen, insbesondere in den westlichen Ländern. Darüber hinaus scheinen Kinder noch stärker betroffen zu sein als Erwachsene, was diese Art von Allergie nicht nur zu einer Last für die Wirtschaft und Sicherheit macht, sondern auch zu einer emotionalen Last. Die effizienteste Strategie zur Behandlung von Lebensmittelallergien ist der Ausschluss des betreffenden Lebensmittels aus der Ernährung, was zuallererst zuverlässige Lebensmittelkennzeichnung und Analysemethoden zur Überprüfung der Einhaltung der Kennzeichnung erfordert. Das Hauptziel dieser Masterarbeit war die Entwicklung eines qualitativen Singleplex-Real-time PCR Assays für den Nachweis von Soja (Glycine max) und seine Validierung als Teil eines qualitativen Triplex-Real-time PCR Assays für den gleichzeitigen Nachweis von Soja, Sellerie (Apium graveolens) und weißem Senf (Sinapis alba) in Lebensmitteln. Die Primer und die TaqMan-Sonde des Singleplex-PCR Assays, die mit Cy5 als Reporterfarbstoff markiert und mit einem Minor Groove Binder modifiziert war, zielen auf eine spezifische, kurze Sequenz innerhalb des Chloroplastengenoms von Soja ab. Es wurden sechs Primer/Sonden-Systeme getestet. Die Konzentrationen der Primer und TaqMan-Sonden wurden optimiert. 86 Arten, die mit Soja sowohl nah als auch nicht nah verwandt sind, wurden auf Kreuzreaktivität untersucht. Die Nachweisgrenze (LOD) wurde mit 0,016 mg Soja/kg Lebensmittel und einem berechneten Ct-Cut-off-Wert von 39,3 ermittelt. Die LODs und berechneten Ct-Cut-off-Werte für Soja, Sellerie und weißen Senf lagen bei 0,06 mg Soja/kg Lebensmittel und 38,5, 0,125 mg Sellerie/kg Lebensmittel und 38,9 bzw. 0,125 mg weißer Senf/kg Lebensmittel und 38,8.
Abstract
(Englisch)
Food allergy cases have been on the rise over the last decades, particularly in Western countries. Moreover, children seem to be even more affected than adults are, making this type of allergy not only an economic and safety burden but an emotional one, too. The most efficient management strategy of food allergy is dietary exclusion of the offending food, requiring first and foremost reliable food labelling and analytical methods to check the label’s compliance. The main purpose of the master’s thesis was to develop a qualitative singleplex real-time PCR assay for the detection of soy (Glycine max) and its validation as part of a qualitative triplex real-time PCR assay for the simultaneous detection of soy, celery (Apium graveolens) and white mustard (Sinapis alba) in food. The primers and the TaqMan probe, labelled with Cy5 as reporter dye and modified with a minor groove binder, of the singleplex PCR assay target a specific, short sequence within the chloroplast genome of soy. Six primer/probe systems were tested. The concentrations of primers and TaqMan probes were optimized. 86 species, both closely and not closely related to soy, were investigated for cross-reactivity. The limit of detection (LOD) was found to be 0.016 mg soy/kg food with a calculated Ct cut-off value of 39.3. The LODs and calculated Ct cut-off values for soy, celery and white mustard were found to be 0.06 mg soy/kg food and 38.5, 0.125 mg celery/kg food and 38.9, and 0.125 mg white mustard/kg food and 38.8, respectively.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
multiplexing real-time PCR food allergens soy celery mustard
Schlagwörter
(Deutsch)
Multiplexing Real-time PCR Lebensmittelallergene Soja Sellerie Senf
Autor*innen
Leonie Lester
Haupttitel (Englisch)
Development of a real-time PCR assay for potentially allergenic soy and its validation as part of a multiplex assay for soy, celery and white mustard
Paralleltitel (Deutsch)
Entwicklung eines Real-time PCR Assays für potenziell allergenes Soja und dessen Validierung als Teil eines Multiplex-Assays für Soja, Sellerie und weißen Senf
Publikationsjahr
2021
Umfangsangabe
VII, 133 Seiten : Illustrationen
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Margit Cichna-Markl
AC Nummer
AC16505519
Utheses ID
61142
Studienkennzahl
UA | 066 | 659 | |