Detailansicht
Genome release of human rhinovirus using molecular beacons
an investigation by capillary electrophoresis an fluorescence spectrometry
Matthias Rizzi
Art der Arbeit
Diplomarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Chemie
Betreuer*in
Ernst Kenndler
DOI
10.25365/thesis.6810
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-30178.64421.937164-8
Link zu u:search
(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Die vorliegende Arbeit bedient sich einer neuen Methode der DNA/RNA Erkennung, der Molecualr Beacon Sonde. Ein Molecular Beacon ist in der Lage eine bestimmte DNA bzw. RNA Sequenz zu erkennen und spezifisch an diese zu binden. In Folge der Hybridisierung von Sonde und DNA/RNA untergeht das Molecular Beacon eine strukturelle Änderung und beginnt zu fluoreszieren.
Die Absicht dieses wissenschaftlichen Projekts war es eine Molecular Beacon Sonde zu designen, die in der Lage ist mit viraler RNA des humanen Rhinoviruses 2 zu hybridisieren und diese Methode für Virusanalysen auf der Kapillarelektrophorese anzuwenden. Human Rhinoviren sind der pathogene Erreger für die allgemeine Verkühlung im menschlichen Körper und daher der Grund für eine der häufigsten Infektionen überhaupt.
Design, Charakterisierung und Anwendung des Molecular Beacons ACGC zur Erkennung viraler RNA sind beschrieben. Schmelzexperimente enthüllen einen starken Einfluß der Mg2+ und einen schwächeren Einfluß der Na+ Konzentration auf de Schmelzeigenschaften des Molecular Beacons. In batch Experimente beweisen, dass das Molecular Beacon auf Grund der Hybridisierung sich öffnet, was in einem sechsfachen Anstieg der Fluoreszenz zu sehen ist. Ergebnisse der kapillarelektrophoretischen Experimente mit Laser induzierter Fluoreszenzdetektion zeigen sogar einen bis zu hundertfachen Anstieg der Fluorezenz für den Hybrid.
Einiger Schwächen dieser Methode zum Trotz konnte gezeigt werden, das dieses neue Werkzeug der bioanalytischen Chemie funktioniert , weitere Untersuchungen zur Verbesserung der Zuverlässigkeit dieser Methode im Speziellen für kapillarphoretische Experimente jedoch gemacht werden müssen.
Abstract
(Englisch)
The present work deals with a new method for DNA/ RNA recognition, the Molecular Beacon probe. A Molecular Beacon is able to recognize and bind to a specific DNA or RNA target sequence. Due to this hybridization of the probe and the target, the Beacon undergoes a conformational change and starts fluorescing.
The aim of this scientific project was to design a Molecular Beacon probe that is able to hybrid-ize upon viral RNA of the Human Rhinovirus 2 and to apply this method for virus analysis by capillary electrophoresis. Human Rhinoviruses are the pathogen agent for the common cold in the human body and therefore the cause for one of the most frequent infections at all.
Design, characterization and application of the Molecular Beacon ACGC for viral RNA recogni-tion are described. Melting experiments reveal a strong influence of Mg2+ and a smaller influ-ence of Na+ concentration on melting properties of the Molecular Beacon. In batch experiments prove that the Molecular Beacon opens due to hybridization, resulting in up to 6-fold increase of fluorescence. Results of Capillary Electrophoresis experiments with Laser Induced Fluorescence detection even show an up to 100fold increase of fluorescence light for the probe-target-hybrid.
Despite some weaknesses of this method it could be shown that this novel tool for bioanalytical chemistry works, but further investigations to improve the reliability of this method especially for capillary electrophoresis experiments have to be done.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
Molecular Beacon capillar electrophoresis human rhinovirus RNA release fluorescence UV
Schlagwörter
(Deutsch)
Molecular Beacon Kappillarelektrophorese humaner Rhinovirus RNA Freisetzung Fluoreszenz UV
Autor*innen
Matthias Rizzi
Haupttitel (Englisch)
Genome release of human rhinovirus using molecular beacons
Hauptuntertitel (Englisch)
an investigation by capillary electrophoresis an fluorescence spectrometry
Paralleltitel (Deutsch)
Genomfreisetzung des humanen Rhinoviruses mittels Molecular Beacons ; eine Untersuchung mit Kappilarelektrophorese und Fluoreszenzspektroskopie
Publikationsjahr
2009
Umfangsangabe
52 S. : Ill., graph. Darst.
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Ernst Kenndler
Klassifikation
35 Chemie > 35.39 Analytische Chemie: Sonstiges
AC Nummer
AC08104051
Utheses ID
6147
Studienkennzahl
UA | 419 | | |