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Identification and characterization of almond proteins homologous to Bet v 1 and their contribution to almond allergy associated with birch pollinosis
Nadja Crvenjak
Art der Arbeit
Masterarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Zentrum für Molekulare Biologie
Studiumsbezeichnung bzw. Universitätlehrgang (ULG)
Masterstudium Molekulare Biologie
Betreuer*in
Merima Bublin
DOI
10.25365/thesis.74102
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-22434.56296.457960-2
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Einleitung: Die mit der Birkenpollinose verbundene Mandelallergie deutet stark auf das Vorhandensein eines kreuzreagierenden Bet v 1-Homologs in Mandeln hin. Ziel der Studie war es, Bet v 1-Homologe aus Mandeln zu identifizieren und ihre allergenen Eigenschaften zu untersuchen. Methoden: Mandelextrakt wurde mittels Tandem-Massenspektrometrie analysiert, um die Proteinsequenzen zu identifizieren, die mit sieben zuvor identifizierten Pru du 1-Genen übereinstimmen. Die identifizierte Isoform Pru du 1.06A wurde in Escherichia coli exprimiert und durch MALDI-TOF und Zirkulardichroismus-Spektroskopie charakterisiert. Das für rPru du 1.06A spezifische IgE wurde mit einem quantitativen ELISA und Seren von Mandelallergikern bestimmt. Die Kreuzreaktivität mit Bet v 1 und anderen Bet v 1-Homologen wurde mit einem dosisabhängigen IgE-ELISA getestet. Seine Fähigkeit, eine Mastzellenaktivierung auszulösen, wurde mit einer humanen FceRI-transfizierten Rattenbasophilen-Zelllinie getestet. Ergebnisse: rPru du 1.06A hat eine Molekularmasse von 18.090 Da, 56 % Aminosäuresequenzidentität und eine nahezu identische Struktur wie Bet v 1. Die Thermostabilitätsanalyse ergab eine Denaturierung von rPru du 1.06A bei 55 °C. rPru du 1-spezifisches IgE wurde in 82 % der untersuchten Seren nachgewiesen. rBet v 1 hemmte die IgE-Bindung an rPru du 1 zu 100 % und umgekehrt zu 40%. Die Kreuzreaktivität zu verwandten Allergenen aus Erdnuss, Pfirsich oder Apfel lag in einem Bereich von 36-81%. Die maximale Zellaktivierung wurde bei einer Konzentration von 1 µg/ml von rPru du 1.06A und 0,1 ng/ml von Bet v 1 erreicht. Schlussfolgerung: Diese Studie liefert die erste experimentelle Konformation eines kreuzreaktiven Bet v 1-Homologs in Mandeln.
Abstract
(Englisch)
Introduction: Almond allergy associated with birch-pollinosis strongly suggests the presence of a cross-reacting Bet v 1- homologue in almond. The aim of the study was to identify Bet v 1-homologues from almond and to investigate its allergenic properties. Methods: Almond extract was analyzed by tandem mass spectrometry to identify the protein sequences matching seven previously identified Pru du 1 genes. The identified isoform Pru du 1.06A was expressed in Escherichia coli and characterized by MALDI-TOF and circular dichroism spectroscopy. IgE-specific to rPru du 1.06A was determined using a quantitative ELISA and sera from almond allergic subjects. Cross-reactivity to Bet v 1 and other Bet v 1 homologous were tested by dose-dependent IgE ELISA. Its ability to induce mast cell activation was tested using a human FceRI-transfected rat basophil cell line. Results: rPru du 1.06A has a molecular mass of 18,090 Da, 56% amino acid sequence identity and nearly identical structure to Bet v 1. Thermostability analysis revealed denaturation of rPru du 1.06A at 55 °C. rPru du 1-spezific IgE was detected in 82% of the tested sera. rBet v 1 inhibited IgE‐binding to rPru du 1 by 100%, while vice versa by 40%. Cross-reactivity to related allergens from peanut, peach or apple was in a range of 36-81%. Maximum cell activation was achieved at a concentration of 1 µg/ml of rPru du 1.06A and 0.1 ng/ml of Bet v 1. Conclusion: This study provides the first experimental conformation of a cross-reactive Bet v 1 homologue in almond.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Deutsch)
Überempfindlichkeitsreaktion Allergie Mandeln Allergene Be t v 1 homologe IgE Kreuzreaktivität Immunoglobulin E
Schlagwörter
(Englisch)
Hypersensitivity reaction Allergy Almonds Allergens Bet v 1 homologs IgE cross-reactivity Immunoglobulin E.
Autor*innen
Nadja Crvenjak
Haupttitel (Englisch)
Identification and characterization of almond proteins homologous to Bet v 1 and their contribution to almond allergy associated with birch pollinosis
Paralleltitel (Deutsch)
Identifikation und Charakterisierung von Mandeln-Proteinen homolog zu Bet v 1 und deren Beitrag zur Mandelallergie im Zusammenhang mit Birkenpollinose
Publikationsjahr
2023
Umfangsangabe
85 Seiten : Illustrationen
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Merima Bublin
Klassifikation
44 Medizin > 44.45 Immunologie
AC Nummer
AC16924323
Utheses ID
67814
Studienkennzahl
UA | 066 | 834 | |