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Discovery of cross-reactive antibodies binding the major birch pollen allergen Bet v 1 and the major apple allergen Mal d 1 using yeast display
Florian Covi
Art der Arbeit
Masterarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Chemie
Studiumsbezeichnung bzw. Universitätlehrgang (ULG)
Masterstudium Biologische Chemie
Betreuer*in
Margit Cichna-Markl
DOI
10.25365/thesis.75172
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-31242.72735.594426-2
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
8-16% der Bevölkerung in Nord- und Mitteleuropa sind durch saisonale Birkenpollenallergien betroffen. Zusätzlich können Birkenpollen komplexe Kreuzallergiemuster gegen ansonsten nicht allergene Nahrungsmittelallergene induzieren, am häufigsten gegen Äpfel. Es wird vermutet, dass die strukturelle Ähnlichkeit des Hauptallergens von Birkenpollen, Bet v 1, zu dem Hauptapfel-allergen, Mal d 1, diese immunologische Kreuzreaktivität erlaubt. Kürzlich wurde gezeigt, dass im Voraus ausgesuchte, allergenspezifische monoklonale IgG Antikörper (blockierende Antikörper) zur Behandlung allergischer Erkrankungen verwendet werden können. Folglich sollten ausreichend affine kreuzreaktive Antikörper zur gleichzeitigen Behandlung mehrerer birkenpollen-assoziierter Allergien verwendet werden können. Da eine erfolgreiche allergen-spezifische Immuntherapie (AIT) mit der Induktion von allergen-spezifischen Antikörpern verbunden ist, verwendeten wir Hefe Display, um das IgG Repertoire eines Patienten, der AIT mit rekombinantem Mal d 1 durchlaufen hatte, abzubilden und durchzusehen. Bibliotheken der leichten und schweren Ketten wurden in Hefestämmen unterschiedlichen Paarungstyps hergestellt und mittels Hefepaarung zu einer kombinatorischen Fab Bibliothek vereinigt. Mittels einer Kombination von magnetischer und fluoreszenzaktivierter Zellsortierung gelang es uns zwei kreuzreaktive Antikörper zu identifizieren, die die gleiche schwere Kette, aber verschiedene leichte Ketten enthielten und Mal d 1 mit einem EC50-Wert von jeweils 97 nM und 130 nM und Bet v 1 mit 62 nM und 110 nM im immobilisierten-Antigen-ELISA banden. Während die Affinitäten der entdeckten Antikörper weit über den Affinitäten liegen, die für den Einsatz als klinische blockierende Antikörper nötig wären, könnten sie nützliche Werkzeuge zur Kartographierung kreuzreaktiver Epitope sein.
Abstract
(Englisch)
8-16% of the population in northern and central Europe are affected by seasonal birch pollen allergies. In addition, birch pollen is able to induce complex patterns of immunological cross-reactivity against non-allergenic food allergens, most frequently apples. It is believed that structural similarities between the major birch pollen allergen Bet v 1 and the major apple allergen Mal d 1 allows for immunological cross-reactivity. Recently, it has been demonstrated that pre-selected, allergen-specific monoclonal IgG antibodies (blocking antibodies) can be used for the treatment of allergic disease. Therefore, sufficiently affine cross-reactive antibodies should allow the simultaneous treatment of multiple birch pollen related allergies. Since successful allergen-specific immunotherapy (AIT) is associated with the induction of allergen-specific IgG antibodies we used yeast display to capture and screen the IgG repertoire of a patient who had undergone AIT with recombinant Mal d 1. Heavy and light chain libraries were created in yeast strains of opposite mating type and combined into a combinatorial Fab display library by yeast mating. Using a combination of magnetic and fluorescence activated cell sorting we were able to isolate two cross-reactive antibodies that contained the same heavy chain with two different light chains, and bound Mal d 1 with and EC50 value of 97 nM and 130 nM, and Bet v 1 with 62 nM and 110 nM in immobilized antigen ELISA, respectively. Whereas the affinities of the discovered antibodies are well above the affinities necessary to be used as blocking antibodies, they might be useful tools to map cross-reactive epitopes.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Deutsch)
Hefe-Display Antikörper IgG IgG4 IgE Hefepaarung Fab-Display Allergie Birkenpollenallergie Apfelallergie Birkenpollen Birkenpollen-assozierte Nahrungsmittelallergie Bet v 1 Mal d 1
Schlagwörter
(Englisch)
yeast display antibody IgG IgG4 IgE yeast mating Fab-display allergy birch pollen allergy apple allergy birch pollen birch poolen-related food syndrom Bet v 1 Mal d 1
Autor*innen
Florian Covi
Haupttitel (Englisch)
Discovery of cross-reactive antibodies binding the major birch pollen allergen Bet v 1 and the major apple allergen Mal d 1 using yeast display
Paralleltitel (Deutsch)
Die Entdeckung kreuzreaktiver Antikörper gegen das Hauptallergen von Birkenpollen Bet v 1 und das Hauptapfelallergen Mal d 1 mittels Hefe-Display
Publikationsjahr
2024
Umfangsangabe
VIII, 76 Seiten : Illustrationen
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Margit Cichna-Markl
AC Nummer
AC17054977
Utheses ID
69896
Studienkennzahl
UA | 066 | 863 | |