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Improved allergy diagnosis by depletion of clinically irrelevant IgE
Simone Nitsch
Art der Arbeit
Diplomarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Lebenswissenschaften
Betreuer*in
Friedrich Altmann
DOI
10.25365/thesis.9109
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-29412.30498.234664-7
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
CCDs (Cross-reactive Carbohydrate Determinants) sind häufig der Grund für falsch positive Ergebnisse in in vitro Allergietests wie RAST oder CAP Test. Diese Strukturen sind in N-Glykanen von Pflanzen, Insekten oder parasitischen Helminthen weit verbreitet und können deswegen Kreuzreaktionen von IgE Antikörpern auslösen. Die zwei Hauptstrukturen die zur Bildung kreuzreaktiver Anti-CCD IgEs führen sind eine α1,3- gebundene Fucose, welche an das innerste N-Acetylglucosamin (GlcNAc) gebunden ist, und eine an Mannose gebundene β1,2-Xylose.
Ungefähr 15 % - 30 % der Pollenallergiker weisen gegen CCDs gerichtete IgE Antikörper im Blut auf. Da diese Antikörper aber meist keine allergischen Reaktionen in den betroffenen Patienten auslösen können sie als klinisch irrelevant angesehen werden. Daher wäre es wünschenswert diese Anti-CCD IgE Antikörper in Blut zu detektieren und zu entfernen bevor das Serum zu weiteren in virto Allergiediagnosen herangezogen wird.
In der vorliegenden Arbeit sollte eine Affinitätsmatrix hergestellt werden mit der es möglich ist gegen CCDs gerichtete IgE Antikörper aus Patientenseren zu entfernen ohne dabei die Menge allergiespezifischer IgE Antikörper zu verändern. Als Anti-CCD IgE Absorber wurde MUXF verwendet welches aus Bromelain gewonnen wurde. MUXF wurde in verschiedene Mengen an diverse Matrizen (z.B. Agarose – Gele, Eupergit) gekoppelt und die Bindungskapazität für IgE wurde mittels ELISA ermittelt. Matrizen die sich bewähren konnten wurden weiters mit CAP evaluiert.
Anti-CCD IgE Antikörper konnten erfolgreich aus den getesteten Patientenseren entfernt werden. Die Affinitätsmatrizen mit der besten Effektivität waren MUXF-BSA gekoppelte ECH Sepharose 4B und Prosep 9-CHO glass beads und MUXF-Lysozym gekoppelte ECH Sepharose 4B. Bis zu 96,7% der gegen CCDs gerichteten IgE Antikörper konnten aus den Seren entfernt werden während durchschnittlich über 90 % der allergenspezifischen IgEs erhalten blieben.
Die Arbeit enthält Bilder.
Abstract
(Englisch)
Cross-reactive carbohydrate determinants (CCDs) are a frequent cause of false positive allergy diagnosis in in vitro allergy tests. These structures are widely spread among N-glycans from plants, insects and also parasitic worms. The two main motifs eliciting anti-CCD IgE production are an α1,3-linked fucose linked to innermost N-acetylglucosamine (GlcNAc) and a β1,2-xylose linked to the core mannose. About 15-30 % of pollen-allergic patients generate CCD directed IgE antibodies. However CCDs do not seem to cause any allergic reaction in most of the patients and can therefore be considered as clinically irrelevant. Therefore an important task would be to determine and remove anti-CCD IgE from patients’ sera before they undergo in vitro allergy diagnosis.
In this work a solid affinity matrix was designed, which can remove anti-CCD IgE from patients’ sera without influencing the amount of allergen specific IgE. For this cartridge, the so-called “MUXF” glycopeptide from bromelain was used as an anti-CCD IgE absorbent and coupled in different amounts to various solid supports. The binding capacity of each affinity matrix was evaluated by determining by ELISA the content of anti-CCD IgE in the sera after incubation with the matrix. Matrices which proved to be successful in ELISA tests were further evaluated by CAP test.
CCD directed IgE antibodies could successfully be depleted from patients’ sera. The matrices with highest efficiency and binding capacity were MUXF-BSA coupled ECH Sepharose 4B and Prosep 9-CHO glass beads and MUXF-Lysozyme coupled ECH Sepharose 4B. Up to 96,7% CCD-specific IgE could be removed from patients’ sera while over 90 % of allergen-specfiic IgE retained in the
This work contains pictures.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
allergy CCD chromatography antibody IgE
Schlagwörter
(Deutsch)
Allergie CCD Chromatographie Antikörper IgE
Autor*innen
Simone Nitsch
Haupttitel (Englisch)
Improved allergy diagnosis by depletion of clinically irrelevant IgE
Paralleltitel (Deutsch)
Verbesserte Allergiediagnostik durch Entfernung klinisch irrelevanter IgE Antikörper
Publikationsjahr
2010
Umfangsangabe
71 S. : graph. Darst.
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Friedrich Altmann
AC Nummer
AC08167790
Utheses ID
8211
Studienkennzahl
UA | 441 | | |