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Functional analysis of human IL-35 in immune regulation
Sabrina Zeiner
Art der Arbeit
Diplomarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Lebenswissenschaften
Betreuer*in
Johannes Stöckl
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-29844.66157.595869-5
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(Print-Exemplar eventuell in Bibliothek verfügbar)
Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Interleukin-35 (IL-35) ist ein neues Mitglied der IL-12 Familie und besteht aus den Untereinheiten Epstein Barr virus induced gene 3 (EBI3) und p35. EBI3 ist außerdem ein Bestandteil von IL-27 und p35 fungiert in dem Zytokin IL-12 als Untereinheit. Die klassischen Mitglieder der IL-12 Familie (IL-12, IL-23, IL-27) werden von Antigen präsentierenden Zellen, wie zum Beispiel dendritische Zellen (DCs), produziert und regulieren T Zell Funktionen. Hier identifizieren wir das von IL-35+ regulatorischen T Zellen produzierte humane IL-35 als inhibitorischen Faktor für DCs jedoch nicht für T Zellen. Die Induktion der T Zell – Proliferation eingeleitet durch allogene DCs war reduziert als verschiedene Mengen des rekombinanten IL-35 hinzugefügt wurden. Dieser Effekt wurde mit unreifen DCs genauso wie mit LPS – stimulierten DCs erreicht. Nach einer Aktivierung von T- Zellen mittels Antikörpern gegen CD3, CD3/CD28 oder CD3/CD63 konnte die Proliferation von gereinigten peripheren Blut-T Zellen sowie von naiven T Zellen des Nabelschnurbluts durch IL-35 nicht gehemmt werden. Weiters zeigen wir einen hemmenden Effekt von IL-35 auf die Proliferation der HeLa Ohio Zelllinie, epitheliale Zellen aus einem humanen zervikalen Karzinom. Eine vorangehende Behandlung von DCs mit IL-35 (IL-35-DCs genannt) führte auch zu einer inhibierten Kapazität T Zellen zu stimulieren. Das Zytokin-Profil jener IL-35-DCs, die mit LPS aktiviert wurden, zeigt eine verringerte IL-10 und IL-12p40 Produktion und einen leichten Anstieg in der IL-6, IL-1β und der TNFα Sekretion im Vergleich zu unbehandelten DCs. Das Oberflächen-Marker-Profil der DCs weist keine Veränderung nach der IL-35 Behandlung auf. Wir konnten außerdem feststellen, dass ein IL-35 Fusionsprotein an DCs und HeLa Ohio Zellen bindet jedoch nicht an periphere T Zellen und alle anderen getesteten Zelllinien. IL-35 wird von regulatorischen T Zellen, die mit humanen Rhinovirus aktivierten DCs ko-kultiviert wurden, produziert. Hier demonstrieren wir eine Hochregulierung der beiden IL-35 Untereinheiten, EBI3 und p35, in T Zellen nach einer R-DCs Stimulierung. Auch T Zellen, die mit IFNα aktivierten DCs stimuliert wurden, zeigen eine Steigerung der EBI3 und p35 Expression. Wir konnten eine Verringerung der CD2 Expression auf jenen T Zellen feststellen, die mit R-DCs kultiviert wurden. Es wird eine CD2low/-/CD3+ T Zell Population in mononukleären Zellen von frischem Blut gezeigt, die zu circa 1,6% der T Zellen in verschiedenen Spendern vorkommt. Zusammenfassend unterscheidet sich IL-35 von den anderen Mitgliedern der IL-12 Familie, weil es auf DCs aber nicht auf T Zellen wirkt.
Abstract
(Englisch)
Interleukin-35 (IL-35) is a novel member of the IL-12 family and consists of the subunits Epstein Barr virus induced gene 3 (EBI3) and p35, which it shares with IL-27 and IL-12, respectively. The classical IL-12 family members (IL-12, IL-23, IL-27) are produced by antigen presenting cells, in particular dendritic cells (DCs), and regulate T cell function. Here we demonstrate that human IL-35, produced by IL-35+ regulatory T cells, is an inhibitory factor for DCs but not T cells. Induction of proliferation of T cells with allogeneic DCs was reduced when we added graded amounts of recombinant IL-35. This effect could be observed with immature DCs as well as with LPS-stimulated DCs. In contrast, IL-35 did not diminish the proliferation of purified peripheral blood T cells as well as naïve T cells isolated from cord blood upon activation with anti-CD3, CD3/CD28 or CD3/CD63 mAbs. We further demonstrate an inhibitory effect of IL-35 on the proliferation of the epithelial HeLa Ohio cell line, but not on other cell lines. Moreover, pretreatment of DCs with IL-35 inhibited their T cell stimulatory capacity as well. The cytokine profile of these cells activated with LPS illustrates a diminished IL-10 and IL-12p40 release and a slight increase in IL-6, IL-1β and TNFα secretion in comparison to untreated DCs. The surface marker profile of DCs remains unaffected after IL-35 treatment. We exhibit that an IL-35 fusionprotein binds to DCs and HeLa Ohio cells but not to peripheral T cells and all other tested cell lines. The expression of the subunits of IL-35 (EBI3 and p35) is up-regulated in T cells stimulated with human rhinovirus treated DCs (R-DCs) and in T cells stimulated with DCs which were activated with IFNα. The CD2 expression level on T cells co-cultured with R-DCs is lower than on T cells cultivated with DCs. We found out that about 1.6% of total T cells in the peripheral blood are CD2-/low. Thus, IL-35 differs from the other members of the IL-12 family in cause of acting on DCs and not on T cells.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
human IL-35 dendritic cells
Schlagwörter
(Deutsch)
Human IL-35 Dendritische Zellen
Autor*innen
Sabrina Zeiner
Haupttitel (Englisch)
Functional analysis of human IL-35 in immune regulation
Paralleltitel (Deutsch)
Funktionelle Analyse des humanen IL-35 in der Immunregulation
Publikationsjahr
2010
Umfangsangabe
90 S.
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Johannes Stöckl
Klassifikationen
42 Biologie > 42.13 Molekularbiologie ,
42 Biologie > 42.15 Zellbiologie
AC Nummer
AC08241370
Utheses ID
9196
Studienkennzahl
UA | 441 | | |