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The influence of HDL oxidation on cholesterol efflux from mammalian cells
Brigitte Stambera
Art der Arbeit
Diplomarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Fakultät für Lebenswissenschaften
Betreuer*in
Hans Goldenberg
DOI
10.25365/thesis.10611
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-29634.16691.116853-2
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Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Viele Studien bestätigen die atheroprotektive Wirkung von high density
lipoprotein (HDL). Diese wird der Rolle von HDL im „Reversen Cholesterin
Transport“ (RCT) zugeschrieben. Dabei wird überschüssiges Cholesterin aus
peripheren Zellen von HDL zur Leber transportiert und über die Galle
ausgeschieden.
Es wird vermutet, dass HDL seine schützende Wirkung verliert, wenn es durch
freie Radikale oder durch Enzyme mit oxidierender Wirkung, die bei
entzündlichen Erkrankungen- wie auch im Fall der Atherosklerose- im Körper
vermehrt freigesetzt werden, modifiziert wird.
Thema dieser Diplomarbeit war zu erforschen, inwiefern sich Modifikation/
Oxidation von HDL auf den Cholesterinefflux in Zellkultur auswirkt. Für dieses
Projekt wurden folgende Zelllinien verwendet: humane Lebertumorzellen
(HepG2), Zellen, die den HDL-Rezeptor SR-BI überexprimieren (ldlA7-SRBI)
und humane THP-1 Makrophagen. HDL wurde einerseits durch Oxidation
mittels Kupfer und Hyperchlorit, andererseits mittels Kaliumcyanat, modifiziert.
Besonders in den Zelllinien HepG2 und ldlA7-SRBI wurde der Efflux von
Cholesterin aus der Zelle bis zu 70% verringert. THP-1 Makrophagen zeigten in
Bezug auf modifiziertes HDL kaum eine Änderung des Cholesterinefflux.
Mittels Gaschromatographie wurde der Gehalt an Cholesterin nach Behandlung
mit nativem HDL und modifiziertem HDL analysiert. Die HDL Modifizierung
führte zu einem erhöhten Gehalt an zellulärem Gesamtcholesterin (TC), freiem
Cholesterin (FC) und Cholesterinestern (CE). Abschließend wurde untersucht,
ob die Modifizierung zu einer veränderten Affinität zu zellulären Rezeptoren
führt.
Zusammengefasst kann gesagt werden, dass Modifizierungen von HDL den
Cholesterinefflux senken und somit modifiziertes HDL als atherogen angesehen
werden muß.
Abstract
(Englisch)
The cardioprotective effects of high density lipoprotein (HDL) are generally
attributed to reverse cholesterol transport, a process to remove excess
cholesterol from artery wall macrophages to liver for excretion into bile.
It has been proposed that HDL looses its cardioprotective ability through
oxidative modifications by reactive oxygen species or myeloperoxidase, both of
them are present in atherosclerotic lesions in vivo. One potential mechanism
generating dysfunctional HDL involves oxidative modifications of apoA-1, the
major protein of HDL.
This project aimed to characterize, whether oxidation of HDL exhibits alterations
on lipid transfer from HDL to cells and vice versa. Therefore, HDL was oxidized
or modified using copper, potassium cyanate or hypochlorite. The resulting
oxidation products were analyzed on regard lipid oxidation (TBARS assay) and
to electrophoretic mobility. We have analyzed the impact of modified HDL on
cholesterol efflux in human THP-1 macrophages, human hepato-carcinoma
cells (HepG2) and in Chinese hamster ovarian (CHO) cells over-expressing
scavenger receptor class B type 1 (ldlA7-SRBI). HOCl- and Cu2+- induced
modification of HDL resulted in a significant, time–dependent decrease in 3H-
Cholesterol efflux from HepG2 and ldlA7-SRBI cells, whereas THP-1
macrophages exhibited almost no response to modified HDL. Decreased efflux
resulted in elevated free cholesterol (FC), cholesteryl esters (CE) and total
cholesterol (TC) levels, as measured by gas chromatography. Furthermore, we
attempted to analyze, whether these effects were due to altered receptor
interaction as a result of the modifications.
Taken together we found that modified HDL negatively affects cholesterol efflux
in tissue culture cells. The generation of modified or oxidized HDL in vivo might
therefore be regarded as possibly atherogenic.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
HDL oxidation modification efflux cholesterol
Schlagwörter
(Deutsch)
HDL Oxidation Modifikation Efflux Cholesterin
Autor*innen
Brigitte Stambera
Haupttitel (Englisch)
The influence of HDL oxidation on cholesterol efflux from mammalian cells
Paralleltitel (Deutsch)
Der Einfluß von HDL Oxidation auf den Cholesterinefflux von Säugetierzellen
Publikationsjahr
2010
Umfangsangabe
II, 51 S. : Ill., graf. Darst.
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Hans Goldenberg
Klassifikation
30 Naturwissenschaften allgemein > 30.30 Naturwissenschaften in Beziehung zu anderen Fachgebieten
AC Nummer
AC08259362
Utheses ID
9583
Studienkennzahl
UA | 474 | | |