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Protein-protein interactions and post-translational modifications of EAPP
Nazanin Najafi
Art der Arbeit
Diplomarbeit
Universität
Universität Wien
Fakultät
Zentrum für Molekulare Biologie
Betreuer*in
Johann Rotheneder
DOI
10.25365/thesis.10723
URN
urn:nbn:at:at-ubw:1-29412.14182.691670-7
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Abstracts
Abstract
(Deutsch)
Das E2F assoziierte Phosphoprotein (EAPP) wurde kürzlich in einem Two-Hybrid-Versuch in Hefe identifiziert. Das ca. 40 kDa große EAPP besteht aus 285 Aminosäuren, ist im Zellkern lokalisiert und interagiert mit einer Untergruppe von E2F-Proteinen. EAPP stimuliert in der Zelle maßgeblich den Übergang von G1- zu S-Phase und verschwindet in der M-Phase. Somit spielt EAPP eine Rolle in der Zellzyklus-Regulation, kontrolliert aber auch E2F-vermittelte Transkription und beeinflusst die Zellteilung.
Thema dieser Arbeit ist EAPP und seine Interaktionen und Modifikationen nach der Translation. Hierzu wurden verschiedene Verkürzungen von EAPP auf Aktivität und Modifikationen wie Sumoylierung und Acetylierung untersucht, um mehr über die funktionellen Proteindomänen und ihre Regulation herauszufinden. Weiters wurden EAPP-Domänen hinsichtlich ihres Einflusses auf die Proteinstabilität untersucht.
Behandlung mit TSA (einem HDAC-Hemmstoff) induzierte Acetylierung am N-terminalen Teil der EAPP-Verkürzung 1-140. Mittels FACS-Analyse konnte gezeigt werden, dass Zellen, welche die EAPP-Verkürzung 1-140 exprimieren, sehr viel länger brauchen, um nach einer Behandlung mit Nocodazole (arretiert Zellen in M-Phase) eine neue Zellzyklusrunde zu starten. Diese Ergebnisse lassen darauf schließen, dass diese EAPP-Domäne an der Inhibierung von Cyclin-abhängigen Kinase (CDK)-Komplexen beteiligt ist, welche die Übergänge in die verschiedenen Zellzyklus-Phasen kontrollieren.
Mittels Pulse Chase-Versuchen und Cycloheximid-Behandlung von Zellen, welche die EAPP-Verkürzung 1-140 exprimieren, konnte gezeigt werden, dass EAPP an seinem N-terminalen Ende (Verkürzung 1-140) sehr viel stabiler ist. Die Quintessenz dieser Arbeit besagt, dass die Acetylierung von EAPP an seinem N-terminalen Ende seine Stabilität beeinflusst.
Abstract
(Englisch)
An E2F associated phospho protein (EAPP) has been recently identified through yeast two-hybrid assay. EAPP consists of 285 amino acids, weighs about 40 KDa, is localized in the cell nucleus and interacts with a subgroup of E2F proteins. EAPP is involved in cell cycle regulation as it significantly stimulates the S-phase entry of the cell and disappears in M phase. EAPP can control E2F-mediated transcription and affect cell proliferation.
In this study the interactions and post-translational modifications of EAPP have been investigated. Different truncations of this protein were examined for activity and post-translational modifications, among that sumoylation and acetylation, to figure out the functional domains and regulation of EAPP. Besides, the stability of the protein and the domain affecting this character were also studied.
Treatment with TSA, an HDAC inhibitor, induced acetylation of EAPP at its N terminus, within amino acids 1-140.
Through FACS method it was shown that the cells expressing truncated EAPP 1-140, took much longer to re-enter the cell cycle after the release from Nocodazole which arrests the cells at M phase. It in turn shows the possibility of involvement of this truncation in inhibition of cyclin-dependent kinase (CDK) complexes which control the transitions between different phases of the cell cycle.
Utilizing Pulse Chase methods and treating the cells expressing full length or truncated versions of EAPP it was demonstrated that the amino-terminal part of EAPP confers acetylation-dependent stability to the protein.
Schlagwörter
Schlagwörter
(Englisch)
Post-translational modifications Acetylation Protein stability cell cycle protein-protein interaction
Schlagwörter
(Deutsch)
Post-translationale Modifikation Acetylierung Protein Stabilität Zellzyklus Protein - protein Interaktion
Autor*innen
Nazanin Najafi
Haupttitel (Englisch)
Protein-protein interactions and post-translational modifications of EAPP
Paralleltitel (Deutsch)
Protein-protein interaktionen und post-translationale Modifikationen von EAPP
Publikationsjahr
2010
Umfangsangabe
59 S. : Ill., graph. Darst.
Sprache
Englisch
Beurteiler*in
Johann Rotheneder
Klassifikation
42 Biologie > 42.20 Genetik
AC Nummer
AC08329752
Utheses ID
9681
Studienkennzahl
UA | 441 | | |